載體介導(dǎo)siRNA體內(nèi)抑制鼠乳腺癌細(xì)胞KLK6基因表達(dá)及功能研究.pdf

1、山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文載體介導(dǎo)siRNA體內(nèi)抑制鼠乳腺癌細(xì)胞KLK6基因表達(dá)及功能研究姓名：季丙元申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：李云龍胡成進(jìn)20060410山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文‘摘要Kallikrein是一類編碼絲氨酸蛋白酶的基因家族，該家族由15個(gè)成員組成。該家族多數(shù)成員的表達(dá)與激素依賴相關(guān)型腫瘤密切聯(lián)系，暗示了它們與作為前列腺癌臨床生物學(xué)標(biāo)志的前列腺特異性抗原PSA(hK3)一樣，具有生物學(xué)標(biāo)志潛力。KLK6是該

2、基因家族成員之一，編碼絲氨酸蛋白酶(hK6)，據(jù)報(bào)道KLK6與性激素依賴性器官腫瘤一乳腺癌的發(fā)病有關(guān)，但參與的機(jī)制尚不清楚。為此，本課題擬通過(guò)siRNA技術(shù)來(lái)探討該基因在乳腺癌中的功能。目的：運(yùn)用siRNA技術(shù)探討Ki。K6基因在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法：應(yīng)用乳腺癌細(xì)胞株MCF7建立裸鼠乳腺癌動(dòng)物模型，體外合成KLK6siRNA并構(gòu)建其表達(dá)載體，瘤體注射siRNA或其表達(dá)載體，探討siRNA對(duì)荷瘤鼠瘤體細(xì)胞中KLK6基因的干擾效果及

3、其對(duì)瘤體細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。結(jié)果：載體介導(dǎo)的siRNA體內(nèi)抑制了人乳腺癌荷瘤鼠KLK6的表達(dá)后，移植瘤生長(zhǎng)速度加快，腫瘤細(xì)胞S期明顯增加，細(xì)胞凋亡有下降趨勢(shì)。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用了載體介導(dǎo)的siRNA技術(shù)成功抑制了裸鼠體內(nèi)人乳腺癌移植瘤中KLK6基因的表達(dá)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)KLK6mRNA表達(dá)降低、免疫組化檢測(cè)hK6蛋白表達(dá)量明顯減少。流式細(xì)胞儀分析結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組S期細(xì)胞明顯增多、移植瘤生長(zhǎng)速度加快，細(xì)胞凋亡有下降趨勢(shì)。提示KLK