羅格列酮對肥胖患者脂肪細胞中脂聯(lián)素表達的影響.pdf

1、肥胖與健康密切相關，是導致心血管疾病、代謝綜合征、高血壓等多種疾病的獨立危險因素。近年流行病學研究發(fā)現(xiàn)，肥胖者心血管疾病的發(fā)病率較正常體重者明顯增高。脂聯(lián)素是由脂肪細胞分泌的血漿蛋白，在脂肪組織中高表達。大量研究表明，脂聯(lián)素具有抗炎、抗動脈粥樣硬化、增強胰島素敏感性等心血管保護作用。肥胖者血漿脂聯(lián)素水平明顯低于非肥胖者，這可能是肥胖者心血管疾病高發(fā)的原因之一，值得進一步研究。已有大量臨床研究及動物實驗證實噻唑烷二酮類藥（Thiazoli

2、dinediones,TZDs）可升高正常體重者血漿脂聯(lián)素水平及增加脂肪組織mRNA表達。但TZDs是否能使脂聯(lián)素表達明顯降低的肥胖者的脂聯(lián)素表達增加尚不清楚。
　　本研究通過構建人前脂肪細胞原代培養(yǎng)、增殖與分化的模型，選擇TZDs的代表藥物羅格列酮（Rosiglitazone,RSG）干預肥胖者成熟脂肪細胞，檢測脂聯(lián)素mRNA表達及蛋白分泌水平的變化，探討脂聯(lián)素對肥胖者心血管疾病危險因素的預防作用，從而為心血管疾病的預防策略提供

3、新思路。
　　實驗一原代培養(yǎng)人前脂肪細胞及鑒定
　　目的：原代分離培養(yǎng)人前脂肪細胞并誘導分化為成熟脂肪細胞。
　　方法：根據(jù)檢查者的體重質(zhì)量指數(shù)（BMI）分為正常體重者和肥胖者，各3例。脂肪組織采用整形外科吸脂手術（供者知情并同意）獲得。分離培養(yǎng)6例檢查者的前脂肪細胞，用胰島素、地塞米松、三碘甲狀腺原氨酸（T3）及3-異丁基-1-甲基黃嘌呤（IBMX）誘導其分化為成熟脂肪細胞。流式細胞儀鑒定人前脂肪細胞表面標志物，油紅

4、O染色鑒定成熟脂肪細胞。
　　結(jié)果：人前脂肪細胞生長周期分為潛伏期、緩慢生長期、指數(shù)生長期及平臺期。3代以內(nèi)的人前脂肪細胞在誘導21天后可大部分分化為成熟脂肪細胞。油紅O染料可與脂肪細胞內(nèi)的脂質(zhì)特異性結(jié)合。
　　結(jié)論：利用酶消化法成功分離出人前脂肪細胞，并誘導分化為成熟脂肪細胞。
　　實驗二不同濃度羅格列酮對肥胖患者脂肪細胞中脂聯(lián)素表達的影響
　　目的：觀察不同濃度羅格列酮對肥胖患者脂肪細胞中脂聯(lián)素表達的影響。<

5、br>　　方法：實驗分為對照組和RSG處理組，前者培養(yǎng)的成熟脂肪細胞不進行處理；后者的成熟脂肪細胞分別用5、10、20mmol/L的RSG處理24h。免疫熒光染色法觀察脂聯(lián)素在脂肪細胞內(nèi)的定位。收集細胞的培養(yǎng)上清液，用ELISA法檢測脂聯(lián)素蛋白分泌水平。提取細胞的總RNA，用RT-PCR法檢測脂聯(lián)素mRNA表達水平。
　　結(jié)果：脂聯(lián)素定位在脂肪細胞漿內(nèi)，圍繞脂滴分布。肥胖患者成熟脂肪細胞中脂聯(lián)素mRNA表達及其蛋白分泌水平較正常體

6、重者降低（P<0.05）。與各對照組相比較，10、20mmol/LRSG處理組成熟脂肪細胞中脂聯(lián)素mRNA表達及蛋白分泌水平在處理24h后均增高（P<0.01），且呈濃度依賴性；5mmol/LRSG組升高無統(tǒng)計學意義。分別與各組內(nèi)前一濃度相比，10μmol/LRSG處理組較5μmol/LRSG處理組促脂聯(lián)素mRNA表達及蛋白分泌水平明顯增加且差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；20μmol/LRSG處理組較10μmol/LRSG處理組相

7、比，雖然促脂聯(lián)素mRNA表達及蛋白分泌水平有所增加但差異無統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：10、20mmol/LRSG干預成熟脂肪細胞24h均可使脂聯(lián)素表達水平增高。
　　實驗三羅格列酮干預不同時程對肥胖患者脂肪細胞中脂聯(lián)素表達的影響
　　目的：觀察羅格列酮干預不同時程對肥胖患者脂肪細胞中脂聯(lián)素表達的影響。
　　方法：實驗分為對照組和RSG干預組，前者培養(yǎng)的成熟脂胞細胞不進行處理；后者的成熟脂肪細胞分別用10mmol/L

8、的RSG分別處理12、24、48、72h。收集細胞的培養(yǎng)上清液，用ELISA法檢測脂聯(lián)素蛋白分泌的水平。提取細胞的總RNA，用RT-PCR法檢測脂聯(lián)素mRNA表達的水平。
　　結(jié)果：肥胖患者成熟脂肪細胞中脂聯(lián)素mRNA及其蛋白表達的水平較正常體重者降低（P<0.05）。與各組對照組相比較，RSG組成熟脂肪細胞中脂聯(lián)素mRNA和其蛋白表達的水平在處理不同時間（12h、24h、48h、72h）后均明顯增高（P<0.05或P<0.01）