維生素D與代謝綜合征的關(guān)系及其對(duì)前脂肪細(xì)胞增殖分化的影響.pdf

1、背景：維生素D除了經(jīng)典的調(diào)節(jié)鈣、磷代謝的作用外，近期研究發(fā)現(xiàn)其與免疫系統(tǒng)、細(xì)胞的分化增殖以及其它內(nèi)分泌腺體之間有重要的關(guān)系。有研究提示低維生素D水平與代謝綜合征（Metabolic syndrome，MS）間存在相關(guān)性，但結(jié)論尚不統(tǒng)一，是否低維生素D狀態(tài)與MS的危險(xiǎn)因素?肥胖是MS的中心環(huán)節(jié)，是否維生素D對(duì)肥胖的發(fā)生、脂質(zhì)的代謝存在直接影響?目前尚不明確。
　　 目的：1）觀察MS組與對(duì)照組間血25（OH）D水平的差異，及25（

2、OH）D與MS的相關(guān)性，通過(guò)前瞻性干預(yù)研究觀察MS相關(guān)指標(biāo)改善后血25（OH）D水平的變化2）通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)探討1，25（OH）2D3對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖分化的影響。
　　 方法：1.臨床研究：1）病例對(duì)照研究：收集北京平谷地區(qū)MS患者171人，血壓、血糖正常的非肥胖者63人作為對(duì)照，測(cè)量人體測(cè)量學(xué)指標(biāo)的同時(shí)測(cè)定生化指標(biāo)，比較MS患者與對(duì)照人群血25（OH）D水平的差異，了解該組人群25（OH）D與MS間是否存在相關(guān)性

3、。2）前瞻性干預(yù)研究：對(duì)171名MS患者飲食運(yùn)動(dòng)干預(yù)，部分患者給予藥物干預(yù)1年，比較干預(yù)前后隨著MS相關(guān)指標(biāo)改善，血25（OH）D水平的變化。2.體
　　 外研究：1）以無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)3T3-L1細(xì)胞，以MTT法觀察1，25（OH）2D3對(duì)細(xì)胞增殖的影響。2）采用含胰島素、地塞米松與IBMX的分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化3T3-L1細(xì)胞，用油紅O染色及甘油三酯測(cè)定量分析法觀察1，25（OH）2D3對(duì)3T3-L1細(xì)胞分化的影響。3）于增殖

4、第7天及誘導(dǎo)分化后第4天、第12天收集細(xì)胞，提取總RNA并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR觀察1，25（OH）2D3對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡相關(guān)基因（CyclinD1、Bax和BCL-2），維持分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子（PPARγ、CEBP/a），以及脂質(zhì)代謝相關(guān)酶（ACC1、ACS1、G3DPH、HSL）及脂肪因子（Adiponectin、Visfatin）表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：1）與正常對(duì)照人群相比，MS患者維生素D缺乏（<20

5、ng/ml）所占比例較高（90.1％vs79.4％），OR=2.192（1.1191，4.295），P=0.021。MS與BMI及年齡相關(guān)[r=1.857（1.549，2.226），P<0.0005，r=1.126（1.066，1.188），P<0.0005]，未發(fā)現(xiàn)MS與25（OH）D及PTH間存在相關(guān)性。肥胖患者血25（OH）D水平明顯低于非肥胖者（13.974±4.17 vs15.22±4.80ng/ml，P=0.041），PTH

6、水平兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。多元線性回歸分析顯示，MS組血25（OH）D與TC（β=-0.189，P=0.025）、HDL-C（β=-0.188，P=0.025）水平呈負(fù)相關(guān)。干預(yù)1年后隨著患者體重減輕、BMI及腰圍減小、血糖降低、胰島素抵抗減輕及甘油三酯的下降，血25（OH）D水平明顯增高（14.40±4.03 vs16.11±4.02 ng/ml，P<0.0005）。多元線性回歸分析，提示A25（OH）D與ATG相關(guān)0=0.195，P=

7、-0.014）。2）體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，1，25（OH）2D3對(duì)3T3-L1細(xì)胞增殖有明顯抑制作用，該作用呈劑量依賴性，10-7M、10-8M、10-9M濃度組OD值分別為對(duì)照組的39.8±4.0％、48.4±6.9％及64.3±9.7％（P<0.05）。當(dāng)藥物濃度等于10-10M時(shí)抑制作用明顯減弱，OD值為對(duì)照組的79.8±9.9％（P<0.05）。1，25（OH）2D3可抑制增殖相關(guān)基因Cyclin D1的表達(dá)。1，25（OH）2D3

8、可以劑量依賴性方式抑制3T3-L1細(xì)胞分化，分化第12天細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的含量降低，10-8M、10-9M濃度組較對(duì)照組分別降低13.3％和9.8％，P值分別為0.013、0.027。當(dāng)濃度小于等于10-10M時(shí)抑制作用消失。1，25（OH）2D3可抑制PPARγ、C/EBPa mRNA及HSLmRNA的表達(dá)，促進(jìn)G3PDH、ACC1及ACS1 mRNA的表達(dá)，且呈劑量依賴性。同時(shí)1，25（OH）2D3可明顯抑制Adiponectin、V

9、isfatin mRNA表達(dá)，隨著藥物濃度降低，作用減弱。
　　 結(jié)論：1）本研究發(fā)現(xiàn)MS組維生素D缺乏者所占比例明顯高于正常人，但未發(fā)現(xiàn)MS與25（OH）D及PTH水平間存在相關(guān)性。干預(yù)1年后，隨體重、BMI、腰圍、FBG及TG降低，25（OH）D水平增高。2）1，25（OH）2D3對(duì)3T3-L1細(xì)胞的增殖、分化有抑制作用，該作用可能通過(guò)抑制Cyclin D1、PPARγ及C/EBPa基因表達(dá)實(shí)現(xiàn)。同時(shí)可影響脂質(zhì)代謝相關(guān)酶G3