面神經(jīng)撕扯傷后面神經(jīng)元凋亡和星形膠質(zhì)細胞以及c-jun表達變化的實驗研究.pdf

1、目的:1.選擇理想的方法，建立面神經(jīng)撕扯傷動物模型。2.觀察該動物模型中面神經(jīng)運動神經(jīng)元(FMN)的凋亡情況以及星形膠質(zhì)細胞、c-jun表達的變化，探討FMN的生存狀態(tài)，星形膠質(zhì)細胞和c-jun發(fā)揮的作用。 方法:1.SD大鼠40只分為3組：空白組，對照組，神經(jīng)損傷組。麻醉：每次試驗隨機選擇SD大鼠5只，麻醉大鼠。2.耳后溝縱行切開皮膚約1cm，銳性分離皮下組織，于腮腺后上緣暴露筋膜覆蓋的面神經(jīng)主干，充分暴露面神經(jīng)主干，于莖乳孔

2、處撕扯面神經(jīng)主干致顱內(nèi)段部分斷離脫出。對照組同樣暴露面神經(jīng)主干但不作處理。3.神經(jīng)損傷組在建立面神經(jīng)撕扯傷模型后1、4、8、15、30、45、60天分批處死動物，對面神經(jīng)核石蠟包埋切片，進行HE染色，采用原位凋亡細胞檢測法(TUNEL)檢測面神經(jīng)運動神經(jīng)元的凋亡，免疫組化檢測(三步法)星形膠質(zhì)細胞和c-jun基因的蛋白表達水平。 結(jié)果:1.神經(jīng)損傷組16只大鼠100％在手術(shù)后發(fā)生同側(cè)不可逆性面癱。2.可見面神經(jīng)核從第4天開始TU

3、NEL陽性細胞開始增加，15天達凋亡高峰，與正常對照組相差非常顯著(P＜0.01)；凋亡高峰之后，TUNEL陽性細胞有所減少，但仍高于正常對照組。3.星形膠質(zhì)細胞的檢測結(jié)果正常面神經(jīng)核GFAP陽性細胞稀疏，胞體小，胞核難以辨認。面神經(jīng)斷裂后同側(cè)面神經(jīng)核GFAP陽性細胞數(shù)3d開始增加，15d達最多，胞體肥大，胞漿豐富，突起增多延長，免疫組化染色，細胞著色最明顯，與對照組相差非常顯著(P＜0.01)。30d上述反應(yīng)逐漸減弱45d后仍可見到，

4、但胞體明顯縮小，染色變淺反應(yīng)強度仍高于對照組。4.c-jun：神經(jīng)損傷組陽性細胞數(shù)較多，并隨時間而變化：第1天，神經(jīng)損傷組陽性細胞數(shù)量增加，三組間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；此后神經(jīng)損傷組陽性細胞數(shù)緩慢增多，至第4、8天達高峰(P＜0.01)；而后逐漸下降，但仍高于對照組和空白組(P＜0.01)。 結(jié)論:1.面神經(jīng)撕扯傷后同側(cè)面神經(jīng)核星形膠質(zhì)細胞在第4天開始增加，第15天達最多，與對照組相差非常顯著。第30天反應(yīng)逐漸減弱，