TGF-β-,1-作用下成年兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的體外培養(yǎng).pdf

1、前言:外傷或疾病引起的關(guān)節(jié)軟骨損傷在臨床上很常見(jiàn),但軟骨組織中不具有血管與神經(jīng),其損傷后不易自我修復(fù).對(duì)于關(guān)節(jié)軟骨損傷的修復(fù)在目前的骨科臨床、基礎(chǔ)研究中仍是一個(gè)重要的課題.如何體外大量擴(kuò)增得到數(shù)量足夠的自體軟骨細(xì)胞以進(jìn)行關(guān)節(jié)軟骨缺損的組織工程方法修復(fù)是目前實(shí)驗(yàn)研究的重點(diǎn).但以往的實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象大多為胎兔或幼兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,其增殖能力明顯好于成年兔.臨床上關(guān)節(jié)軟骨損傷或嚴(yán)重骨關(guān)節(jié)炎的患者多為老年或成年人,其自我修復(fù)能力極差,以往研究對(duì)此是不

2、適用的.許多研究表明,生物活性因子在關(guān)節(jié)軟骨的損傷、修復(fù)機(jī)制中,起著重要的調(diào)節(jié)作用.許多生長(zhǎng)因子促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖和基質(zhì)表達(dá)已被證實(shí).其中,TGF-β<,1>就是一個(gè)重要的因子.我們以成兔的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞為對(duì)象,研究了TGF-β<,1>對(duì)其增殖和特異性基質(zhì)合成的促進(jìn)作用,為成人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的體外培養(yǎng)擴(kuò)增提供理論和臨床依據(jù).材料與方法:1.成年兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞分離、培養(yǎng):取18月齡的成年日本大耳白兔1只,處死,片狀切取關(guān)節(jié)軟骨,解剖刀將軟骨切成

3、1.0mm<'3>大小碎塊,消化,過(guò)濾,離心,收集關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,加入DMEM培養(yǎng)液(含20％胎牛血清、青霉素100U/ml,鏈霉素100U/ml),調(diào)整細(xì)胞密度為2.5×10<'5>/ml,置于37℃,5％CO<,2>孵育箱內(nèi)培養(yǎng).2.倒置顯微鏡下觀察軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)狀況.3.細(xì)胞爬片HE染色光鏡下觀察軟骨細(xì)胞形態(tài).4.MTT比色試驗(yàn)測(cè)定軟骨細(xì)胞存活數(shù)及TGF-β<,1>促進(jìn)其增殖的最佳濃度.5.細(xì)胞計(jì)數(shù)繪制生長(zhǎng)曲線觀察在TGF-β<,1>