急性消化成年兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞及軟骨單位基因表達(dá)水平的研究.pdf

1、研究背景:軟骨細(xì)胞是關(guān)節(jié)軟骨最基本的解剖結(jié)構(gòu),其與細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)共同構(gòu)成關(guān)節(jié)軟骨。然而,隨著解剖顯微鏡的應(yīng)用及對關(guān)節(jié)軟骨研究的更加深入,有人提出軟骨單位(chondron)的概念,由1個或幾個串珠狀細(xì)胞形態(tài)周圍包裹一層細(xì)胞周基質(zhì)(PCM)構(gòu)成。國內(nèi)外已有大量文獻(xiàn)報導(dǎo)了軟骨細(xì)胞及軟骨單位微管吸吮、生物力學(xué)檢測及單層培養(yǎng)的方法。然而從未從基因水平對其進(jìn)行過系統(tǒng)研究,為此本文在國內(nèi)外最新研究進(jìn)展的基礎(chǔ)上,比較成年兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞及軟骨單

2、位基因表達(dá)水平的差異,從基因水平了解成年兔膝關(guān)節(jié)軟骨結(jié)構(gòu)和代謝變化特點(diǎn)。
　　 目的:探討成年新西蘭大白兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞及軟骨單位(chondron)基因表達(dá)水平的差異。
　　 方法:取成年新西蘭大白兔5只,1％戊巴比妥鈉過量麻醉處死后獲取其雙側(cè)膝關(guān)節(jié)。左側(cè)膝關(guān)節(jié)采用0.4％Pronase酶和0.025％11型膠原酶序貫消化法消化為軟骨細(xì)胞,右側(cè)膝關(guān)節(jié)采用0.3％dispase酶和0.2％11型膠原酶聯(lián)合攪拌消化法消化為

3、軟骨單位。Trizol將其直接裂解后,運(yùn)用RT-PCR的方法觀察其相關(guān)基因表達(dá)水平的差異。包括:基質(zhì)蛋白(AGG,Co1-1A1、A2,Col-6Al、A6,Col-2、10、11)、基質(zhì)金屬蛋白酶及抑制因子(MMP-1、3、9、13,TIMP-1、2、3)、細(xì)胞因子(IL-lb、TNF-a)、單個大分子及細(xì)胞骨架蛋白(Sox-9、Vinculin、Tubulin、Actin)。
　　 結(jié)果:(1)AGG、Co1-2、10、11

4、在成年兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞及軟骨單位中表達(dá)均較高;(2)AGG、Co1-2、Col-6、Co1-1O及TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、Vinculin、Tubulin在軟骨單位中表達(dá)較軟骨細(xì)胞高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05);(3)MMP-1、MMP-13、IL-1b、TNF-a在軟骨單位中表達(dá)較軟骨細(xì)胞低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05);(4)Co1-1、Co1-11、MMP-3、MMP-9、Sox-9、Actin在軟

5、骨細(xì)胞及軟骨單位中表達(dá)未見明顯差異(P＞O.05)。
　　 結(jié)論:AGG、Co1-2、Co1-10及Co1-11在關(guān)節(jié)軟骨中有特異性,軟骨單位與軟骨細(xì)胞相比,其表達(dá)關(guān)節(jié)軟骨正相關(guān)因子(AGG、Co1-2、Co1-6、Co1-10及TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、Vinculin、Tubulin)的能力較軟骨細(xì)胞強(qiáng),而表達(dá)關(guān)節(jié)軟骨負(fù)相關(guān)因子(MMP-1、MMP-13、IL-1b、TNF-a)的能力較軟骨細(xì)胞差,軟骨單位較