GRIM-19對結腸癌凋亡及化療敏感性影響的研究.pdf

1、背景和目的： 轉錄信號轉導子與激活子3（signal transducers and activators of transcription 3，STAT3）及其介導的信號轉導通路參與調節(jié)細胞的增殖，凋亡與分化，并介導細胞的惡性轉化，體內外阻斷（或抑制）某些腫瘤細胞中STAT3信號通路，可誘導瘤細胞凋亡，并抑制瘤細胞生長和存活。近期發(fā)現(xiàn)的干擾素(Interferon，IFN)/維甲酸(retinoid，RA)聯(lián)合應用誘導細胞凋亡

2、相關的基因GRIM-19(Genes associated with Retinoid-Interferon induced Mortality 19，GRIM-19)，屬STAT3特異性抑制蛋白，本研究旨在構建攜帶GRIM-19基因的腺病毒并探討Grim-19對結腸癌凋亡及化療敏感性影響。 方法： 以pcxn2-Grim19 重組質粒為模板，PCR擴增Grim19，將Grim19 cDNA克隆于穿梭質粒pAdTrack

3、-CMV，PmeI線性化后，與腺病毒骨架質粒pAdEasy-1共轉化BJ5183感受態(tài)細胞，獲得帶有Grim19基因的重組腺病毒質粒Ad-Grim19,并酶切鑒定后，經(jīng)PacI線性化后轉染HEK293包裝細胞，觀察細胞內綠色熒光蛋白表達情況，并進行3輪擴增，收獲腺病毒重組病毒子。將重組腺病毒Ad-Grim19轉染sw480細胞并通過流式細胞技術檢測其凋亡表現(xiàn)。Pcxn2-GRIM19與pcxn2-STAT3質粒在脂質體lipofecta

4、mine2000的介導下轉染結腸癌細胞sw480，通過蛋白Western Blot分析GRIM19在sw480細胞中的表達情況；利用流式細胞術檢測GRIM19對細胞凋亡的影響；GRIM19與順鉑聯(lián)合應用后分析sw480細胞凋亡表現(xiàn)及bcl-xl蛋白的表達情況。 結果： 經(jīng)酶切鑒定重組腺病毒Ad-Grim19構建成功，熒光表現(xiàn)表明Ad-Grim19在HEK293包裝細胞中表達；重組腺病毒pAd-Grim19轉染sw480細