大黃酚對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：大黃酚(Chrysophanol，Chry)，化學(xué)名為1，8-二羥基-3甲基葸醌(1,8-dihydroxy-3methyl anthraquinone)，屬于羥基葸醌類(lèi)，為大黃的有效成分之一。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)有關(guān)大黃的報(bào)道很多，作用非常廣泛。早期藥理研究表明，大黃有抗高脂血癥、降低血壓、抗菌、抗腫瘤、瀉下等作用，現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)大黃還具有抑制血栓形成、預(yù)防冠心病的發(fā)生、保護(hù)肺功能、保護(hù)胃腸粘膜、消炎利膽、改善肝腎功能等作用。特別是

2、近年來(lái)實(shí)驗(yàn)研究表明，大黃具有抗衰老作用，能清除氧自由基、抑制膽堿酯酶、增強(qiáng)血及腦組織中超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Glutathione peroxidase，GSH-PX)活性，并能改善學(xué)>-j記憶障礙。而作為大黃的有效成分之一的大黃酚，其藥理作用的文獻(xiàn)報(bào)道卻很少，僅限于傳統(tǒng)的抗菌、瀉下、止血等方面。我室前期工作已證實(shí)大黃酚能明顯減少大鼠肝、腦過(guò)氧化脂質(zhì)生成，對(duì)學(xué)習(xí)記憶有一定

3、的影響，具有抗衰老作用，能改善學(xué)習(xí)記憶障礙。老年性癡呆癥可分為原發(fā)性癡呆癥和血管性癡呆癥，多灶性梗死是導(dǎo)致血管性癡呆的重要病因，嚴(yán)重影響中老年人的生活質(zhì)量。目前大黃酚對(duì)腦缺血再灌注實(shí)驗(yàn)動(dòng)物記憶功能的影響研究未見(jiàn)報(bào)道。本課題采用小鼠短暫性腦缺血模型，研究大黃酚對(duì)腦缺血再灌注損傷后小鼠記憶功能的保護(hù)作用，并進(jìn)行機(jī)制的分析，為其應(yīng)用于臨床治療疾病提供有力的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：采用Himori法暫時(shí)性阻斷兩側(cè)頸總動(dòng)脈制備小鼠腦缺血

4、再灌注損傷的模型進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)研究：避暗法實(shí)驗(yàn)；穿梭實(shí)驗(yàn)；探索運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)；抗氧化酶活性的測(cè)定和耐缺氧實(shí)驗(yàn)。 實(shí)驗(yàn)分組：(1)在避暗法實(shí)驗(yàn)和探索運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)中，手術(shù)后48i1將小鼠放入箱內(nèi)進(jìn)行預(yù)選，在箱內(nèi)自由活動(dòng)3min，3min內(nèi)不進(jìn)入暗室者剔除。將經(jīng)過(guò)預(yù)選的小鼠隨機(jī)分為5組，分別為假手術(shù)組(進(jìn)行手術(shù)，但不進(jìn)行腦缺血再灌注)、對(duì)照組(即腦缺血再灌注組)、大黃酚高劑量組、中劑量組和低劑量組，高、中、低劑量組于缺血前30min分別ip大黃酚

5、10，1，0.1mg.kg<'-1>；假手術(shù)組與對(duì)照組于缺血前30min分別ip溶劑10mg．kg<'-1>。(2)在穿梭實(shí)驗(yàn)、抗氧化酶活性的測(cè)定和耐缺氧實(shí)驗(yàn)中，手術(shù)后48小時(shí)將小鼠隨機(jī)分為5組，分組同上。 結(jié)果： 1 行為學(xué)實(shí)驗(yàn) 1.1避暗法實(shí)驗(yàn)：和假手術(shù)組比較，對(duì)照組小鼠表現(xiàn)出明顯的由腦缺血再灌注損傷所引起的記憶功能障礙，使小鼠進(jìn)入暗室的潛伏期明顯縮短(P<0.01)，錯(cuò)誤次數(shù)明顯增多(P<0.01)。腦缺血

6、前給予大黃酚10，1，0.1mg．kg<'-1>，則對(duì)腦缺血再灌注小鼠所致記憶功能障礙有明顯保護(hù)作用，潛伏期明顯延長(zhǎng)(P<0.01)，錯(cuò)誤次數(shù)減少(P<0.05)。 1．2穿梭實(shí)驗(yàn)：和假手術(shù)組比較，對(duì)照組小鼠表現(xiàn)出明顯的由腦缺血再灌注損傷所引起的記憶功能障礙，小鼠被電擊次數(shù)明顯增加(P<0.01)，電擊時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.01)，主動(dòng)逃避時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.01)。腦缺血前給予大黃酚，則對(duì)腦缺血再灌注小鼠所致記憶功能障礙有明

7、顯保護(hù)作用，小鼠被電擊次數(shù)減少(Chry10 mg．kg<'-1> P<0.01，Chry 1mg．kg<'-1>P<0.05)，電擊時(shí)間明顯縮短(Chry10，1mg.kg<'-1>P<0.01)，主動(dòng)逃避時(shí)間縮短(Chry10mg.kg<'-1>P<0.01，Chrylmg.kg<'-1>P<0.05)。 1．3探索運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn) 1．3．1小鼠到達(dá)暗室時(shí)間、到達(dá)高端時(shí)間、到達(dá)明室時(shí)間、爬高端的次數(shù)比較：和假手術(shù)組相比，

8、對(duì)照組小鼠到達(dá)暗室時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.01)、到達(dá)高端時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.01)、到達(dá)明室時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.01)，小鼠爬高端的次數(shù)明顯減.少(P<0.01)，表現(xiàn)出小鼠明．顯的探索認(rèn)知行為功能障礙。給予大黃酚，則對(duì)腦缺血再灌注小鼠所致探索認(rèn)知行為功能障礙有明顯的改善作用，小鼠到達(dá)暗室時(shí)間明顯縮短(Chry10，lmg.kg<'-1>P<0.01)、到達(dá)高端時(shí)間明顯縮短(Chry10，lmg.kg<'-1>P<0.01)、到達(dá)明

9、室時(shí)間縮短(Chry10，lmg.kg<'-1>P<0.05)，爬高端的次數(shù)明顯增加(Chry10mg.kg<'-1>P<0.01，Chry1mg.kg<'-1>P<0.05)。 1．3．2小鼠在暗室滯留時(shí)間和在明室滯留時(shí)間的比較：根據(jù)實(shí)驗(yàn)技術(shù)指標(biāo)的比較要求，只在同一組內(nèi)進(jìn)行這兩項(xiàng)指標(biāo)比較，對(duì)照組和大黃酚0.1mg.kg<'-1>組的小鼠在暗室滯留時(shí)間和在明室滯留時(shí)間有明顯差異(P<0.001)，而假手術(shù)組，大黃酚高、中劑量組

10、在暗室滯留時(shí)間和在明室滯留時(shí)間無(wú)明顯差異(P>0.05)，說(shuō)明大黃酚對(duì)腦缺血再灌注小鼠所致探索認(rèn)知行為功能障礙有明顯的改善作用。 2.腦內(nèi)抗氧化酶活性的測(cè)定 2．1 腦內(nèi)GSH-PX活力測(cè)定：和假手術(shù)組比較，對(duì)照組小鼠腦內(nèi)GSH-PX活性明顯降低(P<0.01)；大黃酚組對(duì)腦缺血再灌注小鼠腦內(nèi) GSH-PX 活性明顯提高(Chry10mg.kg<'-1>P<0.01，Chry1，0.1mg.kg<'-1>P<0.05)。

11、 2．2 腦內(nèi)SOD活力測(cè)定：和假手術(shù)組比較，對(duì)照組小鼠腦內(nèi)SOD活性明顯降低(P<0.01)；大黃酚組對(duì)腦缺血再灌注小鼠腦內(nèi)SOD活性明顯提高(chry10mg.kg<'-1>P<0.01，Chry 1，0.1mg.kg<'-1>P<0.05)。 2．3 全血中GSH-PX活力測(cè)定：和假手術(shù)組比較，對(duì)照組小鼠全血中GSH-PX活性明顯降低(P<0.01)；大黃酚組對(duì)腦缺血再灌注小鼠全血中GSH-PX活性明顯提高(C

12、hry10mg.kg<'-1>P<0.01)。 2．4 血漿SOD活力測(cè)定：和假手術(shù)組比較，對(duì)照組小鼠血漿SOD活性明顯降低(P<0.01)；大黃酚組對(duì)腦缺血再灌注小鼠血漿SOD活性明顯提高(Chry10，1mg.kg<'-1>P<0.01)。 3.耐缺氧實(shí)驗(yàn) 3．1小鼠斷頭耐缺氧實(shí)驗(yàn)：和假手術(shù)組比較，對(duì)照組小鼠斷頭耐缺氧的喘息時(shí)間明顯縮短(P<0．01)，大黃酚組對(duì)腦缺血再灌注小鼠斷頭耐缺氧的喘息時(shí)間明顯延長(zhǎng)(

13、ChrylO，l mg．kg’P<0．0 1，Chry0．1 mg．kg。P<0．05)。說(shuō)明腦缺血再灌注小鼠急性耐缺氧的能力減弱，大黃酚能提高小鼠急性耐缺氧能力。 3．2小鼠常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)：和假手術(shù)組比較，對(duì)照組小鼠常壓耐缺氧的生存時(shí)間明顯縮短(P<0．01)，大黃酚組對(duì)腦缺血再灌注小鼠常壓耐缺氧的生存時(shí)間明顯延長(zhǎng)(Chryl O，1mg．kg。P<0．01)。說(shuō)明腦缺血再灌注小鼠常壓耐缺氧的能力減弱，大黃酚能提高小鼠常壓耐缺

14、氧能力。 3．3小鼠亞硝酸鈉中毒實(shí)驗(yàn)：和假手術(shù)組比較，對(duì)照組小鼠由于亞硝酸鈉中毒所致缺氧的生存時(shí)間明顯縮短(P<0.01)，大黃酚組對(duì)腦缺血再灌注小鼠由于亞硝酸鈉中毒所致缺氧的生存時(shí)間明顯延長(zhǎng)(Chry10mg.kg<'-1>：P<0.01，Chry1mg.kg<'-1>P<0.05))。說(shuō)明腦缺血再灌注小鼠由于亞硝酸鈉中毒所致耐缺氧的能力減弱，大黃酚能提高小鼠耐缺氧能力。 結(jié)論： 大黃酚對(duì)腦缺血再灌注損傷具有