PDGF-B、BMP-7促進BMSCs向軟骨細胞分化的實驗研究.pdf

1、目的:探討原代骨髓間充質(zhì)干細胞在體外分化為軟骨細胞的條件。骨髓中提取原代骨髓間充質(zhì)干細胞,體外利用BMP-7、PDGF-B誘導具有多分化潛能的骨髓間充質(zhì)干細胞定向向軟骨細胞分化,比較BMP-7、PDGF-B及聯(lián)合時對其誘導分化的促進作用。
　　方法:(1)無菌條件下收集健康、年輕患者因外傷截肢術(shù)后廢棄骨骼中骨髓,4℃冷藏備用。(2)離心管內(nèi)使用配制密度為1.073g/ml的Percoll分離液與稀釋的骨髓分層放置,在1800g條件

2、下低溫離心機離心30分鐘;吸取白霧細胞層與D-Hanks液混合并稀釋三倍后1000g條件下低溫離心10分鐘,重復兩次。(3)離心重懸細胞并取細胞進行計數(shù),按比例接種細胞,用含15％FBS的LG-DMEM培養(yǎng)基在CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)擴增原代細胞,并行細胞形態(tài)學鑒定及流式檢測細胞表面抗原。(4)MTT檢測細胞增殖率,確定細胞因子使用濃度,進行實驗分組。(5)誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向軟骨細胞分化,進行細胞進行甲苯胺藍染色、Western blot及

3、RT-PCR檢測Ⅱ型膠原蛋白含量及mRNA表達量,并予以統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果:(1)成功獲得原代骨髓間充質(zhì)干細胞并進行培養(yǎng)擴增;(2)行光鏡觀察細胞形態(tài)學鑒定及流式細胞術(shù)檢測細胞表面抗原,符合間充質(zhì)干細胞的特點;(3)不同濃度下MTT檢測間充質(zhì)干細胞的增殖效率,以BMP-7200ng/ml及PDGF-B75ng/ml濃度時細胞增殖活躍程度最明顯;(4)在BMP-7、PDGF-B的參與下,骨髓間充質(zhì)干細胞向軟骨細胞定向分化;PDGF