RNA干擾技術沉默A-FABP基因對脂肪細胞合成甘油三酯及脂聯素分泌的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:應用RNA干擾技術,構建針對3T3-L1脂肪細胞A-FABP的Micro RNA表達載體,研究干擾A-FABP基因的表達對脂肪細胞合成甘油三酯及脂聯素分泌的影響。
　　方法:構建靶向A-FABP基因的microRNA表達載體,將上述載體轉染3T3-L1脂肪細胞后,用RT-PCR及Western Blot檢測A-FABP mRNA及蛋白的表達。將誘導成熟的3T3-L1脂肪細胞與0~1mmol/ L的游離脂肪酸(FFA)共孵育2

2、4h,用ELISA法測定其甘油三酯及脂聯素濃度。建立 A-FABP基因沉默細胞模型,選取0.5mmol/L的游離脂肪酸(FFA)與成熟脂肪細胞共孵育24h,實驗分四組:①對照組②對照組+0.5mmol/LFFA③RNAi組④RNAi組+0.5mmol/LFFA;用ELISA法分別測定其甘油三酯及脂聯素的濃度,并用 RT–PCR法檢測沉默前后脂肪細胞A-FABP及脂聯素mRNA的表達。
　　結果:1.設計并構建了靶向A-FABP基因

3、的microRNA表達載體,該載體轉染脂肪細胞后,能顯著抑制A-FABP mRNA和蛋白的表達。2.隨著脂肪酸濃度的增高,與其共孵育的脂肪細胞內甘油三酯濃度隨著增高(P<0.05),而脂肪細胞脂聯素的分泌逐漸降低(P<0.05)。3.與對照組相比,沉默A-FABP基因后的RNAi組脂肪細胞內甘油三酯濃度明顯降低(P<0.05),而脂肪細胞脂聯素分泌增多,其mRNA表達上調,差異具有顯著性( P<0.05)。
　　結論: RNAi技

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