大鼠晶狀體損傷促進視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞存活機制的研究.pdf

1、外傷性視神經(jīng)病變(Traumatic optic neuropathy，TON)是眼眶、顱腦及面部外傷的嚴重并發(fā)癥，往往導致不可治愈的原發(fā)性或繼發(fā)性盲目。長期以來，關于外傷性視神經(jīng)病變的治療一直存在著爭議。理論上講，最終解決這一問題的唯一途徑就是使受損的視神經(jīng)重新再生。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(Retina ganglioncells，RGCs)的存活和其軸突再生有著密切的關系，因此對于視神經(jīng)損傷后如何保護和挽救RGCs存活和促進其軸突再生已成

2、為當前國內(nèi)外研究的熱點。
　　 近年來，Leon和Fischer等研究發(fā)現(xiàn)，大鼠晶狀體的損傷能極大地促進視神經(jīng)損傷后RGCs的存活及大量軸突再生通過視神經(jīng)斷端。已有研究證實鼠類視網(wǎng)膜內(nèi)Müller細胞提取液(Murine Müller cells conditioned medium，MMG)可促進離體培養(yǎng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞存活及軸突的生長，但是晶狀體損傷能否會使視神經(jīng)損傷大鼠的視網(wǎng)膜中Müller細胞的表達發(fā)生變化一直鮮見報道

3、。本實驗采用動物實驗的方法進行這方面的研究。
　　 目的：研究Müller細胞在晶狀體損傷促進視神經(jīng)橫斷傷后RGCs存活中的變化及作用。
　　 方法：選用健康成年Wistar大鼠作為實驗動物，共40只。隨機分為3組：正常對照組8只，單純損傷組16只，聯(lián)合損傷組16只。正常對照組大鼠飼養(yǎng)7天后處死，其余2組分別在術后7天和14天各處死相應的大鼠8只。HE染色觀察視網(wǎng)膜組織形態(tài)學的變化，通過免疫組化方法用神經(jīng)膠質(zhì)原纖維酸性蛋

4、白(glial fibrillary acidic proteln，GFAP)標記視網(wǎng)膜內(nèi)Müller細胞，顯微鏡下觀察各組大鼠各時間點視網(wǎng)膜內(nèi)RGCs數(shù)量及GFAP陽性Müller細胞表達變化。
　　 結果：
　　 1.正常大鼠視網(wǎng)膜各層次清晰，神經(jīng)纖維層排列規(guī)則，RGCs大多為單層排列，細胞間無炎癥細胞，細胞計數(shù)為52.98±1.90。
　　 術后第7天，單純損傷組存活RGCs數(shù)為36.61±1.69，其丟失

5、率為30.90％；聯(lián)合損傷組存活RGCs數(shù)為50.76±2.77，其丟失率為4.19％；3組中存活RGCs數(shù)量兩兩比較，除正常對照組和聯(lián)合損傷組間差異無統(tǒng)計學意義(P=0.053)外，其余兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。術后第14天，單純損傷組存活RGCs數(shù)為22.67±1.94，其丟失率為57.22％；聯(lián)合損傷組存活RGCs數(shù)為35.69±1.80，其丟失率為32.62％；3組中存活RGCs數(shù)量兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學意

6、義(P=0.000)。
　　 2.正常組視網(wǎng)膜中，Müller細胞胞體所在的內(nèi)核層GFAP著色不明顯，神經(jīng)纖維層見淺棕色斑點狀著色，RGCs的胞膜著色不明顯，內(nèi)叢狀層可見少量與視網(wǎng)膜垂直的細絲狀淺棕色著色。
　　 術后第7天，單純損傷組視網(wǎng)膜內(nèi)核層可見陽性細胞，陽性細胞數(shù)為29.38±2.04，呈淺棕色，可見胞體和突起的肥大。神經(jīng)纖維層及RGCs胞膜亦可見斑點狀著色，內(nèi)叢狀層、外叢狀層、外核層及色素細胞層亦可見GFAP陽

7、性著色。術后第7天，聯(lián)合損傷組視網(wǎng)膜內(nèi)核層中陽性細胞數(shù)為48.96±2.80，呈深棕色，且伴有陽性細胞胞體和突起的肥大。單純損傷組和聯(lián)合損傷組陽性細胞數(shù)差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。
　　 術后第14天，單純損傷組視網(wǎng)膜內(nèi)陽性細胞數(shù)為19.07±2.14，但未見胞體和突起的肥大。較同組7天時陽性細胞數(shù)量下降，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。聯(lián)合損傷組術后第14天陽性細胞數(shù)為46.73±1.50，與同組第7天相比，差異無

8、統(tǒng)計學意義(P=0.067)，且都伴有陽性細胞胞體和突起的肥大。術后第14天，單純損傷組和聯(lián)合損傷組陽性細胞數(shù)差異亦有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。
　　 結論：
　　 1.視神經(jīng)橫斷傷后，隨著時間的推移RGCs進行性丟失。
　　 2.晶狀體損傷可顯著促進視神經(jīng)橫斷傷后RGCs的存活，且這種保護作用在損傷的早期更強。
　　 3.晶狀體損傷可顯著促進視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜內(nèi)Müller細胞GFAP的活化，且活化