TGF-β誘導(dǎo)晶狀體上皮細胞基質(zhì)金屬蛋白酶表達的實驗研究.pdf

1、　　目的：(1)明確TGF—β1對晶狀體上皮細胞增殖的影響。(2)明確體外培養(yǎng)晶狀體上皮細胞是否存在基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix Metalloproteinases, MMPs)表達。(3)研究TGF—β1對晶狀體上皮細胞MMPs表達的影響。
　　方法：(1)原代培養(yǎng)牛晶狀體上皮細胞并傳代,酶譜法檢測原代、1代、2代、3代細胞培養(yǎng)液中MMPs活性。(2)原代細胞長滿融合后,傳入96孔板(10~4/孔),分別使用含不同濃度TGF—

2、β1(終濃度為0.1、1、10ng/ml)的5%小牛血清培養(yǎng)液培養(yǎng),對照組用加入等體積蒸餾水的的5%小牛血清培養(yǎng)液培養(yǎng)。24小時后收集細胞培養(yǎng)液,酶譜法檢測MMPs活性。細胞用血細胞計數(shù)板法進行細胞計數(shù)。(3)1代牛晶狀體上皮細胞用含10ng/ml TGF-β1的5%小牛血清培養(yǎng)液培養(yǎng),12、24、36、48、72小時后分別收集培養(yǎng)液,酶譜法檢測MMPs活性。細胞用血細胞計數(shù)板法進行細胞計數(shù)。對照組為加入等體積蒸餾水的5%小牛血清培養(yǎng)液

3、培養(yǎng)的牛晶狀體上皮細胞。
　　結(jié)果：(1)細胞計數(shù)結(jié)果：0.1、1、10ng/ml的TGF-β1作用24小時后細胞數(shù)分別為：1.65±0.12、1.4±0.15、1.34±0.22、1.3±0.17×10~4個/孔。對照組為：1.65±0.12×10~4個/孔。10ng/ml的TGF-β1作用12、24、36、48、72小時后細胞計數(shù)：1.04±0.10、1.29±0.17、1.30±0.15、1.47±0.22、1.56±0.2

4、6×10~4個/孔,對照組12、24、36、48、72小時細胞計數(shù)：1.32±0.13、1.65±0.12、1.75±0.16、1.85±0.16、2.36±0.16×10~4個/孔；(2)體外培養(yǎng)的原代、1代、2代、3代細胞培養(yǎng)液中均未檢測到MMPs活性。(3)加入TGF-β1后細胞培養(yǎng)液中均檢測到MMPs活性,分別為MMP-2(明膠酶A)和MMP-9(明膠酶B)。濃度為0.1、1、10ng/ml的TGF-β1作用24小時后,每10~

5、4個細胞分泌的MMP-2活性分別為：699.79±60.77、870.20±46.45、989.50±98.44,MMP-9活性為：171.28±17.33、233.91±25.49、279.6±15.52。對照組未檢測到MMP-2及MMP-9活性。(4)加入TGF-β1(終濃度10ng/ml)12、24、36、48、72小時后,兩種明膠酶活性隨時問呈上升趨勢。MMP-2不同時間點的活性為：730±31.37,990±110.0,110

6、2.2±46.42,1272.8±25.08,1639.2±39.69；MMP-9不同時間點的活性為：227.2±21.65,279.6±15.52,346.6±36.07,510.8±62.83,679.4±108。對照組未檢測到MMP-2及MMP-9活性。
　　結(jié)論：(1)TGF-β1抑制牛晶狀體上皮細胞的增殖。(2)正常牛晶狀體上皮細胞不表豎南大學(xué)碩卜學(xué)位淪文l巧F一p誘分品狀體}一皮細胞基質(zhì)金屬蛋白酶表達的實驗研究達M人」