G6PD缺乏癥基因診斷新方法的建立及遺傳學分析.pdf

1、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)缺乏癥是最常見的人類酶缺陷病之一，世界范圍內(nèi)約有4億人受累?；颊吲R床表現(xiàn)變化大，從無癥狀到新生兒黃疸、藥物或感染造成的急性溶血、蠶豆病和重癥慢性非球形細胞血溶性貧血，嚴重者導致新生兒期重癥核黃疸，造成死亡或永久性神經(jīng)系統(tǒng)的損傷。該病的及早診斷和預防是我國優(yōu)生優(yōu)育工作的一個重要組成部分，檢測是否存在G6PD缺乏，給患者合理的忠告，避免使用可能引起溶血的藥物，合適處理由此引起的新生兒高膽紅素血癥，是該病的重

2、點。 本研究擬建立一種新的G6PD基因診斷方法，可以同時針對包括中國南方在內(nèi)的東南亞人群常見的10種點突變和1種多態(tài)性進行基因分型。其工作原理是：利用DHPLC完全變性條件下，DNA雙鏈解開，依據(jù)Sanger的雙脫氧鏈終止原理，進行引物延伸，即在突變位點前后設計引物，針對突變位點添加突變型雙脫氧核糖核苷酸(ddNTP)，當引物與模板結合至突變位點時延伸終止。在DHPLC體系中，相同長度的單鏈DNA分子的保留時間與它們的堿基組成有

3、關，根據(jù)固定相對不同堿基的親和力，按照待分析片段3'端堿基C、G、A、T的次序進行洗脫，從而分離單鏈DNA并檢測出已知突變。 全文小結: 1、建立了用于G6PD缺乏中國人群常見基因突變PE/DHPLC分析方法。該方法具有十分明顯的技術優(yōu)勢，表現(xiàn)在該方法易于質(zhì)量控制，對照的設置及其特征性檢測圖譜對于操作者有很好的直觀提示作用；結果易于判讀，實驗結果只需看相應位置的峰的有無即可判定相應突變的有無，并判定基因型；同時，該方法檢

4、測突變覆蓋廣，一次擴增、兩步延伸可以同時對11種突變類型做出診斷；準確、高效，大大提高發(fā)現(xiàn)稀有突變和新突變的可能性；經(jīng)濟、快捷，檢測一例標本只需40元人民幣，一天可檢測65例標本，為大型流行病學調(diào)查、臨床篩查提供有效手段。這一檢測模式的建立，大大提高了基因診斷水平，對G6PD研究起重要的推動作用，同時該方法適用于檢測一個有限長度的基因片段中存在著突變熱點這樣的對象，也為其它人類遺傳性疾病的分子診斷提供借鑒。 2、首次全面分析了2

5、09例來自廣西柳州和廣東廣州地區(qū)的G6PD缺乏樣本的基因突變類型和基因型，發(fā)現(xiàn)11種點突變、1種多態(tài)性和1種中性突變，鑒定出30種已知突變基因型，包括一批首次報道的基因型。 3、檢測發(fā)現(xiàn)1311多態(tài)性位點的樣本均伴發(fā)IVS1193T-C，推測這可能與致病性有關。 4、從基因型和表型關系入手，分析不同基因突變和基因型酶活性的不同，結果顯示半合子、雜合子、突變純合子G6PD/6PGD比值有統(tǒng)計學差異，1024突變與95、13

6、88突變G6PD/6PGD比值有統(tǒng)計學差異。這對于指導G6PD的臨床分類和進一步的分子診斷很有價值。 5、開展廣西柳州地區(qū)男性分子流行病學調(diào)查，提供了相對完整的G6PD缺乏癥基因突變、基因型以及表型資料，完善了地區(qū)基因突變譜，并為制訂地區(qū)G6PD缺乏癥的預防計劃提供有價值的參考。 本研究通過新的基因診斷方法的建立，克服了以往方法學的限制，為中國南方地區(qū)G6PD缺陷的診斷、預防提供新的篩查手段，并可積累有價值的中華民族基因