五例遺傳性凝血因子Ⅴ缺乏癥的基因分析.pdf

1、遺傳性凝血因子缺乏癥是一類單基因遺傳性出血性疾病，發(fā)病率較低，但患者自幼患病，終生受累，危害性極大，更嚴(yán)重的是可以傳給后代。通過對此類疾病相關(guān)的基因突變進(jìn)行研究，有助于確定診斷、有效治療和優(yōu)生優(yōu)育，而且能夠?yàn)樯钊胝J(rèn)識相關(guān)凝血因子蛋白結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系提供線索。同時，研究不同的基因突變所引起的臨床表型差異及其現(xiàn)有的凝血理論間的矛盾也將有助于豐富和完善對機(jī)體止凝血機(jī)制的認(rèn)識。 目的：分別對5例遺傳性凝血因子Ⅴ(coagulatin f

2、actor V，F(xiàn)V)缺乏患者進(jìn)行基因分析和家系調(diào)查，鑒定導(dǎo)致FV缺乏癥的基因突變。 方法：采用一期法檢測血漿F V活性，ELISA法檢測血漿F V的抗原含量，PCR法擴(kuò)增FV基因的25個外顯子及其側(cè)翼序列，DNA測序并與Genebank比對以確定基因異常，限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)分析或直接測序患者直系家屬及正常人相應(yīng)的等位基因。分子建模分析突變對整個分子空間結(jié)構(gòu)的影響。 結(jié)果：5例患者血漿FV活性和抗原含量均明

3、顯降低，基因分析共發(fā)現(xiàn)6個致病突變，3個是新鑒定的突變位點(diǎn)，其中一個為國際上首次報道的位于B區(qū)的錯義突變。病例1在Fv基因23外顯子存在G69969T純合突變，導(dǎo)致導(dǎo)致2079Gly→Val；病例2由13外顯子雙雜合突變所致，其中一突變G45533A導(dǎo)致712Arg→Ter，另一突變位點(diǎn)C45366T導(dǎo)致656Cys→Tyr，通過建模分析發(fā)現(xiàn)突變后不能與575Cys形成穩(wěn)定的二硫鍵；病例3的13外顯子存在C46253T的純合突變，導(dǎo)致9

4、52Arg→Cys，該突變是國際上首次報道位于B區(qū)的錯義突變。病例4的13外顯子存在C46796T純合突變導(dǎo)致1133Arg→Ter。病例5經(jīng)檢測在3外顯子存在G16088C純合突變，導(dǎo)致68Asp→His，這也是一個新的突變位點(diǎn)，分子建模分析發(fā)現(xiàn)該突變導(dǎo)致分子穩(wěn)定性降低。通過對直系親屬和正常人相應(yīng)的等位基因進(jìn)行擴(kuò)增測序或PCR．RFLP分析證實(shí)了新的突變不是基因多態(tài)性所致。 結(jié)論：G69969T、G45533A、C45366T