局灶性腦缺血大鼠內源性神經干細胞的分化以及神經營養(yǎng)因子分泌情況的研究.pdf

1、背景：
　　 腦缺血、外傷等病理情況下的神經再生過程目前并沒有完全研究清楚。關于缺血后受損神經功能修復的多種可能機制中，一種假說是新生神經元直接取代受損的神經元，重建長程傳導束，從而恢復受損的神經功能；另外一種假說是內源性神經干細胞分泌神經營養(yǎng)因子來促進功能的恢復。
　　 目的：
　　 確認成年大鼠局灶性腦缺血后誘導的內源性神經干細胞增殖分化為神經元后能否有新生投射神經元的出現，并重建受損的長程神經傳導束；以及研

2、究局灶性腦缺血后神經干細胞可能存在的分泌功能，揭示神經營養(yǎng)因子對腦缺血后神經功能恢復可能起到的促進作用。
　　 方法：
　　 本實驗主要是分為兩部分。第一部分主要是應用超聲多普勒探頭實時監(jiān)測局部腦血流(regionalCerebralBlowFlow，rCBF)制作大腦中動脈梗阻(Medialcerebralarteryocclusion，MACO)模型來模擬局灶性腦缺血損傷的形成，然后通過使用免疫熒光雙重染色及逆行示蹤

3、結合免疫熒光方法來研究成年大鼠局灶性腦缺血損傷后內源性神經干細胞的增生及分化情況。第二部分主要是通過酶聯免疫吸附試驗(Enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)和逆轉錄聚合酶鏈反應(Reversetranscriptpolymerasechainreaction，RT-PCR)方法研究成年大鼠局灶性腦缺血后三種神經營養(yǎng)因子，神經生長因子(Nervegrowthfactor，NGF)、腦源性神經營養(yǎng)因子(

4、Brain-derivedneurotrophicfactor，BDNF)和神經營養(yǎng)素-3(Neurotrophin-3，NT-3)的分泌情況。
　　 結果：
　　 在第一部分，我們發(fā)現在大鼠局灶性腦缺血后，存在于側腦室下區(qū)(Subventricularzone，SVZ)和海馬齒狀回(Dentategyrus，DG)的內源性神經干細胞開始增殖，基本上在損傷后第一周新生細胞數目即達到高峰，隨后逐漸下降，術后4周時增殖的細胞

5、與對照組無明顯的差異。增殖后的內源性神經干細胞可以向缺血損傷周邊區(qū)域遷移。增殖的新生細胞最終可以分化為中間神經元，但是不能分化為投射神經元，亦不能重建受損的長程神經傳導束。
　　 在第二部分，ELISA結果顯示腦缺血損傷可以促進多種神經營養(yǎng)因子的分泌，分泌時相和內源性神經干細胞的增殖一致。我們發(fā)現，缺血性損傷以后，成年大鼠腦脊液(Cerebrospinalfluid，CSF)內的幾個主要的神經營養(yǎng)因子NT-3，NGF的蛋白含量明

6、顯增加，基本上在腦缺血術后第一周蛋白水平達到最高，隨著MACO術后時間的延長，蛋白含量均呈下降趨勢，數據存在一定的統(tǒng)計學意義。而BDNF的蛋白表達同其他兩個營養(yǎng)因子存在差異，BDNF蛋白含量在腦缺血后的4周內呈現“U”字形的表現，雖然同樣是在術后1周左右達到高峰，隨后下降，但是2周后又從低谷重新表達增多，在4周出現新的表達高峰。RT-PCR結果顯示NT-3、BDNF、NGF的mRNA的轉錄在不同時間、不同的腦組織區(qū)域有差異性表現?；镜?/p>

7、趨勢是缺血同側的mRNA的轉錄水平隨著缺血后時間的延長而逐漸升高，相反的，缺血對側的腦皮層內的mRNA的轉錄水平卻是隨著缺血后時間的延長而逐漸降低。
　　 結論：
　　 我們的研究結果表明成年大鼠局灶性腦缺血損傷可以提高SVZ區(qū)和DG區(qū)的細胞增殖。同時，新生的細胞繼而形成神經元，不過新生的神經元的分化卻是有選擇性。我們認為，新生神經元能夠分化為中間神經元，但是不能分化為投射神經元。同時，無法重塑因腦缺血損傷所致的長程神經