植物金屬硫蛋白擬南芥細胞表達與抗重金屬能力研究.pdf

1、金屬硫蛋白是廣泛存在于生物體內的一種富含巰基的功能性蛋白，其分子量根據(jù)不同物種來源在6～14千道爾頓之間有所變化，但氨基酸的保守序列有極高的同源性。研究證明，金屬硫蛋白的內含巰基通過氧化還原過程具備了在生物體內攜帶和轉移雙價金屬離子的功能。 本研究金屬硫蛋白(BjMT-2)cDNA克隆基因分離于芥菜屬印度芥菜(Brassicajuncea)。將BjMT-2基因與綠色熒光蛋白報告基因融合，構建瞬時表達載體pFF19/BjMT-2：

2、：GFP，對照pFF19/GFP，穩(wěn)定表達載體pBINA/BjMT-2：：GFP及對照pBINA/GFP，用PEG介導的方法將pFF19/BjMT-2：：GFP及對照瞬時轉入擬南芥原生質體中表達，基因槍法將pBINA/BjMT-2：：GFP與pBINA/GFP轉入擬南芥表皮細胞，在激光共聚焦掃描顯微鏡下利用GFP所發(fā)出的綠色熒光對表達蛋白進行熒光跟蹤。BjMT-2作為外源基因在轉入植物細胞內表達后，可能被轉運到原生質內特定的靶器官以發(fā)揮

3、相應的特定或輔助的功能，或因過量表達而被轉運到液泡中或直接排出體外，液泡目前認為是隔離或降解對植物細胞質內各種重要酶類有毒害作用的物質的重要器官。 BjMT-2作為外源基因轉入模式植物擬南芥中表達，經篩選得到陽性植株，收獲子二代種子以供重金屬脅迫實驗。本文試圖確定外源BjMT-2基因在植物細胞中表達后植物所可能具備的抵御重金屬環(huán)境的能力，并對可能的重金屬結合機制進行分析和推測。根據(jù)植物對重金屬拮抗能力的實驗結果，轉BjMT-2的