同種異體移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠重癥急性胰腺炎并發(fā)心肌、肺損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 探討同種異體移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠重癥急性胰腺炎并發(fā)心肌、肺損傷的價(jià)值及其機(jī)制，為臨床應(yīng)用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療重癥急性胰腺炎心肌、肺損傷提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 通過全骨髓貼壁法培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)至第三代備用；經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)鑒定BMSCs。將90只健康雌性SD大鼠，體重200±20g，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組(S組)、模型組(SAP組)和治療組(B組)。SAP組

2、、B組采用胰腺被膜下多點(diǎn)注射4％?；悄懰徕c(0.5ml/kg)復(fù)制SAP模型。造模后24h經(jīng)大鼠尾靜脈注射1mlBMSCs懸液(1.0×106個(gè)/mL)于S組和B組，而SAP組只注射1mlPBS。于移植后第1、7、14d通過腹主動(dòng)脈放血法將大鼠分批處死，采集血清檢測血淀粉酶(AMY)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)；用ELISA法檢測血清TNF-a、IL-10；并將胰腺、心肌及肺組織置于4％中性甲醛溶液中固定，常規(guī)切片、HE染色；采用免疫

3、組織化學(xué)方法檢測心肺組織中TNF-a、IL-10的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1、通過全骨髓貼壁法可提取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，10h后可見少許細(xì)胞貼壁，培養(yǎng)至第10天即可生長約90％融合，傳至第三代后可見細(xì)胞大小形態(tài)比較均一的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。
　　 2、BMSCs定位：移植組(B組)及假手術(shù)組(S組)各時(shí)間點(diǎn)大鼠胰腺、肺組織、心肌組織中均可檢測到Sry基因片段(雄性大鼠細(xì)胞來源的標(biāo)記物)。
　　 3、淀粉酶

4、(AMY)：SAP組及B組血淀粉酶在各時(shí)間點(diǎn)顯著升高，與S組比較差異有顯著差異(P<0.01)；移植后24小時(shí)B組血淀粉酶低于SAP組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；移植后7天、14天有顯著差異(P<0.01)。
　　 4、肌酸激酶同工酶(CK-MB)：SAP組及B組血清CK-MB在各時(shí)間點(diǎn)顯著升高，與S組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；移植后24小時(shí)B組血清CK-MB與SAP組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；移

5、植后7天、14天有顯著差異(P<0.01)。
　　 5、胰腺組織學(xué)評(píng)分：①SAP組、B組各時(shí)間點(diǎn)與S組比較，有顯著性差異(P<0.01)。②移植24小時(shí)后，B組與SAP組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；移植第7天、第14天相比有顯著性差異(P<0.01)。
　　 6、肺組織學(xué)評(píng)分：①SAP組、B組各時(shí)間點(diǎn)與S組比較，有顯著性差異(P<0.01)。②移植24小時(shí)后，B組與SAP組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05

6、)；移植第7天、第14天相比有顯著性差異(P<0.01)。
　　 7、心臟組織學(xué)評(píng)分：①SAP組、B組各時(shí)間點(diǎn)與S組比較，有顯著性差異(P<0.01)。②B組與SAP組各時(shí)間點(diǎn)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 8、組織中TNF-α、IL-10蛋白的表達(dá)：①心?。築組、SAP組各時(shí)間點(diǎn)與S組比較，有顯著性差異(P<0.01)；B組與SAP組各時(shí)間點(diǎn)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。②肺：SAP組、B組移

7、植后第1、7天與S組比較，有顯著性差異(P<0.01)；B組與SAP組相比，移植后第1天，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；移植后第7天有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；移植第14天后，表達(dá)有顯著性差異(P<0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1、經(jīng)胰腺被膜下點(diǎn)狀注射4％?；悄懰徕c可成功復(fù)制重癥急性胰腺炎模型，并對肺臟、心臟造成不同程度損傷。
　　 2、經(jīng)尾靜脈移植的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可遷移至損傷胰腺、肺臟、心肌組織。<