甘露糖受體在脂多糖誘導的急性肺損傷中的表達.pdf

1、前言： 甘露糖受體(mannose receptor，MR)，作為一個固有的模式識別受體，在巨噬細胞、未成熟樹突狀細胞及一部分內皮細胞中都有表達，是一種重要的抗原提呈分子和信號轉導受體。 急性肺損傷(acute lung injury，ALI)，是呼吸系統(tǒng)疾病中的危重癥，其定義是：心源性以外的各種肺內外致病因素引起的急性，進行性缺氧性呼吸衰竭，是肺部炎癥和通透性增加的綜合征。對慢性鼻竇炎和鼻息肉病人的研究發(fā)現(xiàn)，鼻息肉患者

2、的鼻竇粘膜處巨噬細胞MR的mRNA有明顯的升高[1]。Marzolo MP亦發(fā)現(xiàn)腦內巨噬細胞—腦小膠質細胞表面的MR能被地塞米松上調[2]。但是甘露糖受體在急性肺損傷中的表達情況及其在急性肺損傷中的作用機制，目前國內外還未有報道。 目的： 研究甘露糖受體在脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)誘導的急性肺損傷中的表達情況，并探討其可能的作用機制，為臨床藥物治療找尋新的靶點。 方法： 雄性S

3、D小鼠，隨機分為3組：1．對照組；2．模型組；3．地塞米松(dexameathone，DXM)(0.5 mg/kg)組。通過氣管內滴注LPS(3 mg/kg)建立ALI模型，地塞米松組在滴注前5分和滴注后3小時，尾靜脈注射地塞米松(dexameathone，DXM)(0.5mg/kg)，對照組注射相應劑量0.9％生理鹽水。滴注LPS6小時后處死動物，行肺濕/干重比，肺滲透指數(shù)(pulmonary permeability index，P

4、PI)，支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)中白細胞和中性粒細胞計數(shù)，肺和BALF中髓過氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)，單核細胞趨化蛋白-1(monocyte chemotacticprotein1，MCP-1)活性，腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)—α，白介素(interleukin，IL)-10檢測，并觀察光學顯微鏡下肺損傷的程度

5、。本實驗通過實時定量RT—PCR測定各組中甘露糖受體(MR)的含量，并用Western Blot檢測核轉錄因子—κB(nuclear transcription factor—κB，NF—κB)的蛋白表達水平，觀察急性肺損傷中甘露糖受體的表達情況及其與核轉錄因子—κB的關系，探討甘露糖受體在急性肺損傷中的作用及其可能的機制。 結果： 1．甘露糖受體在LPS誘導的急性肺損傷中表達下調：本實驗以氣管內滴入LPS誘導小鼠產(chǎn)生A

6、LI，動物模型表現(xiàn)出肺泡內PMN的大量滲出，肺泡壁對液體和蛋白的滲透性升高，肺濕/干重比、PPI、BALF中白細胞和PMN計數(shù)、肺勻漿中和BALF中MPO、TNF—α和IL-1b水平顯著增高，以及肺部的ALI的病理損傷改變．以上均為小鼠ALI的基本特征，提示本實驗小鼠ALI模型建立成功。實時定量RT—PCR檢測發(fā)現(xiàn)急性肺損傷模型中甘露糖受體mRNA的量下降，比正常對照組下降了約20.1％(P＜0.05)。 2．地塞米松拮抗LPS

7、誘導的急性肺損傷炎癥并上調MR：LPS組的肺濕/干重比(4.67±0.37)與正常組(4.07±0.31)比較明顯升高(P＜0.05)，DXM(0.5 mg/kg)靜脈注射明顯抑制LPS誘導的肺部水腫(P＜0.05)。LPS組肺勻漿中MPO水平升高，與對照組比較上升了58.8％(P＜0.05)，地塞米松減少LPS誘導的肺勻漿中MPO活性的上升(P＜0.05)。LPS組的BALF中的TNF—α、IL-1b和MCP-1水平顯著上升，分別達到

8、對照組的24倍、12倍和16倍(P＜0.01)，DXM(0.5mg/kg)靜脈注射明顯抑制TNF—α、IL-1和MCP-1(p＜0.05)的活性。實時定量RT—PCR檢測發(fā)現(xiàn)地塞米松組中甘露糖受體mRNA的量上調，比LPS組增加了約66.3％(P＜0.05)。 3．上調甘露糖受體能抑制LPS誘導的急性肺損傷中NF—κB/p65的表達：WesternBlot檢測顯示，在正常肺組織中有低水平的NF—κB/p65表達，經(jīng)LPS(3 m

9、g/kg)刺激6h后肺組織中NF—κB/p65表達明顯增高，達到正常對照組的4.5倍。預先給予DXM(0.5mg/kg)靜脈注射，能明顯抑制LPS所誘導的急性肺損傷中NF—κB/p65高水平表達。 結論： 甘露糖受體在脂多糖誘導的急性肺損傷中表達下調，通過上調其水平能抑制急性肺損傷肺組織中NF—κB/p65蛋白的表達，提示甘露糖受體可能與NF—κB信號通路有關，進而在mRNA水平上抑制LPS所致的急性肺損傷中TNF—α、