轉(zhuǎn)抗蟲基因（BtCry3A）741楊抗蟲性研究.pdf

1、為探索轉(zhuǎn)抗蟲基因(BtCry3A)741楊對(duì)鞘翅目昆蟲的抗蟲性，本研究以7個(gè)轉(zhuǎn)基因株系CC70、CC71、CC31、CC11、CC22、CC84、CC53植株為檢測(cè)對(duì)象，以未轉(zhuǎn)基因的普通741楊為對(duì)照，從分子生物學(xué)檢測(cè)、毒蛋白的表達(dá)、對(duì)鞘翅目昆蟲的致死作用和不同外源基因的抗蟲選擇性4個(gè)方面對(duì)轉(zhuǎn)抗蟲基因(BtCry3A)741楊進(jìn)行了分析，以期為轉(zhuǎn)抗蟲基因株系的擴(kuò)繁和商品化生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。 根據(jù)PCR檢測(cè)結(jié)果可知，轉(zhuǎn)抗蟲基因(B

2、tCry3A)741楊7個(gè)株系和轉(zhuǎn)雙抗蟲基因(BtCrylAc+API)741楊的2個(gè)株系均檢測(cè)到目的基因的存在。Southern雜交分析得出，Bt基因已成功整合到轉(zhuǎn)抗蟲基因741楊中。 通過在五月份和九月份對(duì)轉(zhuǎn)抗蟲基因(BtCry3A)741楊當(dāng)年生枝上部、中部、下部、韌皮部和木質(zhì)部進(jìn)行ELISA檢測(cè)的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，五月份不同部位的葉片的毒蛋白的分布沒有形成一定的規(guī)律，而九月份毒蛋白含量成從高到低分布，且五月份的含量高于九月份；兩

3、個(gè)月份的木質(zhì)部毒蛋白含量均高于韌皮部，且五月份的含量高于九月份。 通過抗蟲性試驗(yàn)得出，柳藍(lán)葉甲(Plagioderaversicolora(Laicharting))幼蟲的死亡率在轉(zhuǎn)基因741楊各株系間差異性很小，各株系對(duì)柳藍(lán)葉甲幼蟲的致死作用均很強(qiáng)；并且各轉(zhuǎn)基因株系當(dāng)年生枝上、中、下部葉片對(duì)幼蟲的致死作用沒有形成一定的規(guī)律，幼蟲的死亡率在1-2d之內(nèi)均為100﹪。而在不同的溫度下，在35℃下，各株系對(duì)柳藍(lán)葉甲幼蟲的致死作用最強(qiáng)

4、；而在室溫，22℃，28℃下幼蟲的存活天數(shù)要多于在35℃下的存活天數(shù)，幼蟲第1d的死亡率也小于在35℃下的幼蟲。桑天牛(Aprionagermari(Hope))幼蟲體重增長(zhǎng)均受轉(zhuǎn)基因741楊枝條和木質(zhì)部的一定影響，用各株系飼養(yǎng)的桑天牛幼蟲均沒有用普通741楊飼養(yǎng)的體重增長(zhǎng)的快，且個(gè)體沒有用普通741楊飼養(yǎng)的桑天牛幼蟲個(gè)體大。不同株系間，桑天牛蟲體重增長(zhǎng)情況不同，存在一定差異。 通過對(duì)桑天牛成蟲的室外飼養(yǎng)結(jié)果可以得出，桑天牛對(duì)轉(zhuǎn)

5、抗蟲基因(BtCry3A)741楊的其中3個(gè)株系不作為產(chǎn)卵對(duì)象，其余作為產(chǎn)卵對(duì)象的除了CC22產(chǎn)卵粒數(shù)明顯少于對(duì)照。通過接種以后，各株系的當(dāng)年的存活率均高于對(duì)照；但到了第2a調(diào)查存活率時(shí)，轉(zhuǎn)基因的各株系樹體內(nèi)桑天牛幼蟲存活率均小于對(duì)照。 檢測(cè)轉(zhuǎn)不同基因楊樹對(duì)昆蟲的致死作用的選擇性，得出轉(zhuǎn)雙抗蟲基因(BtCrylAc+API)741楊對(duì)柳藍(lán)葉甲幼蟲和桑天牛幼蟲的生長(zhǎng)和發(fā)育均沒有影響，柳藍(lán)葉甲可以順利的完成一個(gè)世代；桑天牛幼蟲的體重