脂肪細胞因子及脂聯素受體在大鼠非酒精性脂肪性肝病發(fā)病中的作用研究.pdf

1、目的：為了研究NAFLD的發(fā)生及其嚴重程度與脂聯素、瘦素、抵抗素等脂肪細胞因子和肝臟脂聯素受體mRNA的關系，以高脂飲食誘導大鼠不同程度NAFLD的動物模型，用ELISA的方法檢測其血清脂聯素、瘦素和抵抗素，用RT-PCR的方法檢測其肝臟脂聯素受體mRNA的表達；通過羅格列酮干預后，觀察NAFLD病變程度的變化，以及相應血清脂肪細胞因子和肝臟脂聯素受體mRNA表達的變化。以此研究NAFLD的發(fā)病機制，探討脂肪細胞因子、尤其脂聯素及其受體

2、在NAFLD的發(fā)病中的作用，并作為NAFLD防治的新靶點提供理論和實驗依據。 方法：將80只雄性SD大鼠隨機分為對照(C)組、高脂飲食(88％普通飼料+10％豬油+2％膽固醇，F)組和高脂飲食+羅格列酮(R)組，于第2、4、8、12周末分別處死6只正常對照和10只高脂飲食大鼠。R組于高脂飲食喂養(yǎng)至第9周初時予羅格列酮3 mg.kg<'-1>.d<'-1>灌胃，給藥4周末處死，同期C組和F組大鼠予等量配藥溶劑灌胃。所有動物禁食10

3、小時后腹腔注射戊巴比妥鈉(45 mg/kg體重)麻醉后開胸、腹；心臟穿刺取血，全血室溫下靜置半小時，4℃ 3000rpm離心15分鐘后取血清置于-80℃保存，最后統一行ELISA檢測脂聯素、瘦素和抵抗素水平；抽血后取全肝，稱取肝濕重，并立即切取肝右葉同一部位肝臟組織，立即置于10％中性福爾馬林中固定，行組織切片病理檢查，剩余肝組織液氮速凍后置于-80℃冰箱保存，抽提總RNA后進行脂聯素受體R1和R2的RT-PCR檢測。 結果：各

4、組大鼠體重均逐漸增加，C組與同期F組間無顯著差異(P>0.05)；F組大鼠肝濕重和肝指數均較同期C組顯著升高(P<0.05)。肝組織病理染色顯示F組大鼠肝細胞增大，細胞索排列紊亂，胞質內脂滴沉積，并隨高脂飲食時間延長脂滴增大增多，早期出現細泡性空泡變性，后期出現大泡性空泡變性，高脂飲食4周時出現少量炎細胞浸潤，8周時大量炎細胞浸潤，并有點片狀壞死，12周時竇周少量纖維化形成。病理評分結果提示隨高脂飲食時間的延長肝臟脂肪變性、炎癥評分和纖

5、維化評分升高。(1)與C組相比，F組大鼠的血清轉氨酶和血脂水平均明顯高于對照組(P<0.05)，血清脂聯素水平逐漸降低，自第2周起即有顯著性差異(F組3.96±0.48 mg/ml vs C組5.48±2.46 mg/ml，P<0.01)；血清瘦素水平逐漸升高，至第12周時差異具有統計學意義(F組6.39±1.25 ng/ml vs C組3.90±0.40ng/ml，P<0.01)；抵抗素水平逐漸降低，至第4周時差異顯著(F組24.98

6、±5.21ng/ml vs C組44.05±2.85 ng/ml，P<0.01)；肝臟脂聯素受體AdipoR1 mRNA與β-actin mRNA的比值逐漸上升，至第4周起差異顯著(F組0.449±0.057 vs C組0.436±0.025 P<0.01)，AdipoR2 mRNA與β-actin mRNA的比值逐漸下降，至第2周起差異顯著(F組0.504±0.006 vs C組0.556±0.028 P<0.01)。 (2)與同期F

7、組相比，用羅格列酮干預4周后，R組體重、肝濕重和肝指數均無顯著差異，肝臟脂肪變性無明顯改善(P>0.05)，炎癥、纖維化評分有所降低，但差異不顯著(P>0.05)。R組的AST和血脂水平有所改善(P<0.05)，血清脂聯素水平升高(R組6.98±1.02 mg/ml vs F組3.77±0.61 mg/ml，P<0.01)，瘦素水平升高，抵抗素水平降低，但后兩者差異不顯著(P>0.05)；肝脂聯素受體mRNA表達無明顯變化(均P>0.0