綠原酸在非酒精性脂肪性肝病中的作用及其分子機制研究.pdf

1、第一部分綠原酸減輕脂肪酸誘導的HepG2細胞脂質沉積
　　實驗目的:
　　既往研究表明，綠原酸可調節(jié)機體糖脂代謝，提高胰島素敏感性。非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)被認為是代謝綜合征在肝臟的表現(xiàn)，綠原酸對其作用尚不明確。本研究旨在利用體外實驗來初步探討綠原酸對NAFLD的作用及其分子機制。
　　材料和方法:
　　體外實驗選取人肝癌細胞株HepG2細胞，采用游離脂肪酸(FFA)刺激48h誘導NAFLD體外細胞模型，

2、采用不同濃度的綠原酸刺激HepG2細胞來觀察綠原酸體外刺激對肝細胞脂質沉積的影響。利用Western Blot及熒光定量PCR(qRT-PCR)等手段檢測相關通路蛋白表達及其mRNA水平。采用小干擾RNA（siRNA）技術或藥物抑制劑來對通路各靶點進行基因敲減或藥物抑制。利用肝細胞甘油三酯含量測定和油紅O染色評價肝細胞脂質沉積的情況。
　　結果:
　　本研究通過體外實驗發(fā)現(xiàn):給予50μM綠原酸刺激HepG2細胞24小時，可減

3、輕FFA誘導的肝細胞脂質沉積。通過分別對SIRT1、AMPK和LKB1進行藥物抑制或siRNA基因敲減預處理，可阻斷綠原酸對肝細胞脂質沉積的保護作用。綠原酸減輕脂質沉積的作用首先是通過上調SIRT1蛋白表達，增加其去乙?；钚?再通過磷酸化激活LKB1，由其介導并向下磷酸化激活AMPK;繼而上調脂質氧化蛋白MLYCD和CPT1α的表達促進脂肪酸β氧化，同時降低脂質合成蛋白SREBP1c和FAS的表達抑制脂質合成。
　　結論:

4、>　　本實驗證實綠原酸可能通過SIRT1-LKB1-AMPK通路減輕FFA誘導的HepG2細胞脂質沉積。
　　第二部分綠原酸減輕高脂飲食誘導的小鼠肝臟脂質沉積
　　實驗目的:
　　結合第一部分體外實驗中初步確立的綠原酸保護肝細胞脂質沉積作用及其機制，我們利用小鼠在體試驗來驗證綠原酸的作用及分子通路。
　　材料和方法:
　　體內實驗選取5-6周齡的C57BL/6小鼠，分別采用正常飲食、正常飲食添加綠原酸、高脂

5、飲食、高脂飲食添加綠原酸喂養(yǎng)8周觀察綠原酸對高脂飲食誘導的小鼠肝臟脂質沉積的影響。利用肝臟組織甘油三酯含量測定、H&E或油紅O染色來評價肝臟脂質沉積的情況。利用Western Blot及qRT-PCR等手段檢測相關通路蛋白表達及其mRNA水平。
　　結果:
　　在高脂飲食的同時，飲水中添加綠原酸喂養(yǎng)8周可減輕由高脂飲食造成的肝臟脂質沉積。結合第一部分結果，對SIRT1-LKB1-AMPK信號通路進行驗證:綠原酸可增加SIRT