三氧化二砷誘導雞MD腫瘤細胞凋亡機理的研究.pdf

1、雞馬立克氏病(Marek'sdisease，MD)是一種由馬立克氏病病毒(MDV)引起的以淋巴細胞增生為病變特征的腫瘤性疾病，由于超強毒株不斷出現(xiàn)，使傳統(tǒng)疫苗不能起到很好的保護作用，在長期使用HVT疫苗預防MD的過程中，國內外均有關于免疫失敗的報道，給本病的控制和消滅帶來了巨大的困難。而且雞MD的許多特性與哺乳動物腫瘤的發(fā)生有相似之處，被作為研究腫瘤性疾病的良好模型。三氧化二砷(As2O3)首先被用于急性早幼粒細胞白血病(APL)治療，

2、現(xiàn)已經(jīng)引申到實體瘤的治療上，由此推動了對其抗腫瘤機制的研究。目前關于As2O3抗MD腫瘤機制的研究還很少，本課題選擇MDCC-MSB1細胞系為試驗對象，通過對細胞凋亡相關指標的檢測，進而探討其誘導細胞凋亡的機制，為臨床應用As2O3治療MD及其他腫瘤性疾病提供理論依據(jù)。研究結果表明： 1.采用四唑藍快速比色法(MTT法)觀察As2O3對MDCC-MSB1細胞生長的抑制作用，結果表明各濃度組As2O3均可以抑制MDCC-MSB1細

3、胞增殖，且抑制率具有劑量依賴性。 2.倒置顯微鏡下觀察MDCC-MSB1細胞生長情況；吖啶橙/溴化乙錠(AO/EB)雙熒光染色熒光顯微鏡下觀察不同濃度下As2O3誘導MDCC-MSB1細胞凋亡的形態(tài)學變化。結果表明As2O3誘導MDCC-MSB1細胞凋亡，且凋亡率具有劑量依賴性。 3.應用Rhodamine123染色流式細胞術檢測法檢測△ψm變化，結果表明As2O3可通過引起MDCC-MSB1細胞△ψm降低而誘導細胞凋亡

4、。 4.RT-PCR方法檢測MDCC-MSB1細胞Caspase3mRNA表達水平；Caspase3比色檢測試劑盒，應用酶標儀檢測Caspase3活性的變化，結果表明Caspase3活性增加是As2O3引起MDCC-MSB1細胞凋亡的關鍵因素。 5.應用Fura-2/AM熒光法和RT-PCR方法分別檢測細胞內[Ca2+]i的變化和CaMmRNA表達水平，結果表明As2O3可通過引起MDCC-MSB1細胞內[Ca2+]i增

5、加，鈣穩(wěn)態(tài)失衡機制而誘導細胞凋亡。 6.RT-PCR方法檢測MDCC-MSB1細胞Fas表達水平。結果表明As2O3可通過引起MDCC-MSB1細胞FasmRNA的表達增加而誘導細胞凋亡，這可能是As2O3誘導MDCC-MSB1細胞凋亡的機制之一。 As2O3能抑制MDCC-MSB1細胞的生長并誘導其凋亡。As2O3誘導凋亡與降低MDCC-MSB1細胞△ψm，增加細胞內[Ca2]i，Caspase3mRNA表達Caspa