針藥結合對實驗性乳腺增生大鼠血管（VEGF、bFGF）生成的影響.pdf

1、目的：女性的生理活動受到自身機體內分泌的調節(jié)。傳統(tǒng)理論認為乳腺增生病與內分泌失調有關。乳腺增生病作為一種良性病變，它是育齡期婦女的常見病，多發(fā)病，發(fā)病率占全部乳房疾病的74.1％，且有逐年上升的趨勢，其患病人群乳腺癌發(fā)生率較普通人群高2～3倍，因此積極治療乳腺增生病，對預防其發(fā)生癌變、提高婦女生活質量具有重要意義。目前，西醫(yī)對本病尚缺乏令人滿意的治療措施，其內分泌療法副作用較大，長期使用可干擾體內激素的平衡，不宜作為常規(guī)用藥。本課題在臨

2、床已經證實針灸和中藥治療乳腺增生病有效的基礎上，通過復制乳腺增生的大鼠模型，采用針藥結合的治療方法，與單純服用中藥、單純應用針灸以及西藥三苯氧胺(TAM)相比較，觀察其療效；并通過分析模型大鼠血清和乳腺組織中細胞因子的變化與乳腺組織增生的相關性，揭示乳腺增生病從微血管生成方面的部分發(fā)病機理，并探討針藥結合對其的干預調節(jié)作用，豐富和發(fā)展中醫(yī)治療學。 方法：選用健康清潔級雌性Wistar大鼠60 只，75～85日齡，體重220+20

3、g，按照隨機數字表法將其分為6組，每組10只：即正常對照組(簡稱“正常組”)、模型對照組(簡稱“模型組”)、模型+針刺組(簡稱“針刺組”)、模型+中藥組(簡稱“中藥組”)、模型+針刺+中藥組(簡稱“針藥組”)、模型+TAM陽性對照組(簡稱"對照組")。除正常組大鼠常規(guī)喂養(yǎng)外，其余組參照張璐等造模方法，大鼠腹腔注射苯甲酸雌二醇0.5mg/kg/日，連續(xù)25天，然后注射黃體酮5mg/kg/日，連續(xù)5天，建立大鼠乳腺增生的模型。從第31天開始

4、，各組分組治療。針刺組：造模后，根據《中國獸醫(yī)針灸學》，結合人體穴位，選取"屋翳"、"合谷"、"膻中"、"足三里"，行捻轉手法，每日治療1次，9次為一療程，療程間休息1天，治療三個療程，共30日。中藥組：造模后，按25g/kg/日灌服中藥，30日。針藥組：造模后，針刺操作同針刺組，同時灌服中藥，劑量同中藥組，干預30日。對照組：造模后，給予三苯氧胺1.8mg/kg/日，相當于臨床等效劑量，干預30日。正常組和模型組灌服同體積的蒸餾水，3

5、0日。末次針灸給藥5小時后，游標卡尺測量第2對乳房的直徑。斷頭取血，制備血清。放射免疫法測定血清生殖激素雌二醇(E2)、孕酮(P)和催乳素(PRL)的含量。酶聯免疫法測定血管內皮生長因子(VEGF)和堿性成纖維細胞生成因子(bFGF)的含量。無菌操作楔形取下大鼠第3對乳房，用4％的多聚甲醛溶液固定，石蠟包埋切片，常規(guī)旺染色，在光鏡下進行組織形態(tài)學觀察。同法取下大鼠的第5對乳房組織，運用免疫組化法觀察VEGF和bFGF的表達。 結

6、果： 1、大鼠乳頭直徑的變化與正常組相比，模型組大鼠乳頭直徑明顯增大，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。經治療后，針刺組、中藥組乳頭直徑減小，與模型組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；對照組和針藥組乳頭直徑明顯減小，與模型組相比有顯著性差異(P<0.01)。 2、血清生殖激素結果與正常組相比，模型組大鼠血清中E2的含量明顯升高(P<0.01)。經治療后，針刺組、中藥組含量均降低，與模型組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)

7、；對照組和針藥組E<,2>含量明顯降低，與模型組比較有顯著性差異(P<0.01)。 與正常組相比，模型組大鼠血清中P的含量明顯降低(P<0.01)。經治療后，針刺組、中藥組和對照組含量均有升高的趨勢，但與模型組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；針藥組含量明顯升高，與模型組比較有顯著性差異(P<0.01)。 與正常組相比，模型組大鼠血清中PRL的含量升高，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。經治療后，針刺組、中藥組和對照組PRL

8、的含量均有降低的趨勢，但與模型組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；針藥組含量降低，與模型組比較有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。 3、血清VEGF、bFGF的變化與正常組相比，模型組大鼠血清中VEGF的含量明顯升高(P<0.01)。經治療后，針刺組、中藥組含量均有降低的趨勢，但與模型組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；與模型組比較，針藥組、對照組血清VEGF含量均降低，其差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01，P<0.05)。 與

9、正常組相比，模型組大鼠血清中bFGF的含量明顯升高(P<0.01)。經治療后，針刺組有降低的趨勢，但與模型組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；中藥組、對照組和針藥組血清bFGF含量均降低，與模型組比較有統(tǒng)計學差異(P<0.05，P<0.01，P<0.01)。 4、乳腺組織VEGF、bFGF的表達 4.1乳腺組織VEGF的表達情況VEGF的陽性表達定位于細胞漿內，為棕黃色染色。與正常組相比，模型組大鼠乳腺組織中VEGF的表

10、達增強(P<0.01)。經治療后，針刺組、中藥組和針藥組VEGF的表達均明顯低于模型組，且與模型組比較有顯著性差異(均P<0.01)；對照組與模型組比較有降低的趨勢，但兩組之間比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 4.2乳腺組織bFGF的表達情況bFGF的陽性表達定位于細胞漿內，為棕黃色染色。與正常組相比，模型組大鼠乳腺組織中bFGF的表達增強(P<0.01)。經治療后，針刺組、中藥組和針藥組bFGF的表達均明顯低于模型組，且與模

11、型組比較有顯著性差異(均P<0.01)；對照組與模型組比較有降低的趨勢，但兩組之間比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 結論： 1、乳腺增生模型大鼠乳頭直徑明顯增大，血清中E<,2>和PRL的含量較正常組升高，P的含量較正常組降低，提示生殖激素的內分泌紊亂是導致乳腺增生發(fā)生的重要因素。與臨床相符，提示模型復制成功。 2、乳腺增生模型大鼠血清中VEGF和bFGF的含量較正常組升高，在局部的乳腺組織中亦存在著表達活性的