腹主動(dòng)脈縮窄大鼠左室肥厚及替米沙坦、苯磺酸氨氯地平預(yù)防肥厚的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、第一部分：大鼠腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)后左室肥厚模型建立及替米沙坦、苯磺酸氨氯地平預(yù)防肥厚作用的研究
　　 [目的]建立腹主動(dòng)脈縮窄(AAC)高血壓左室肥厚(LVH)大鼠模型，評(píng)價(jià)替米沙坦與苯磺酸氨氯地平預(yù)防LVH的作用。
　　 [方法]8周齡SD雄性大鼠行腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)(AAC)及假手術(shù)(Sham)，術(shù)后1周行超聲心動(dòng)圖、尾套法測(cè)壓、血流動(dòng)力學(xué)、病理檢查后，AAC組大鼠隨機(jī)分為替米沙坦組、氨氯地平組及AAC對(duì)照組，前兩組分別給予

2、替米沙坦Smg/kg/day、苯磺酸氨氯地平5mg/kg/day共8周，處死前再次行超聲心動(dòng)圖、尾套法測(cè)壓、血流動(dòng)力學(xué)及病理學(xué)檢查。
　　 [結(jié)果]1．大鼠AAC術(shù)后存活率為76.3％，與Sham組相比，術(shù)后1周HR、SBP、DBP、LVESP分別增加了10.7%、18.9%、8.8%、19.2%(P＜0.05)，心臟超聲及病理學(xué)改變無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。術(shù)后9周，HR、SBP、DBP、LVESP分別增加22.3%、38.1%、22.0

3、%、40.9%(P＜0.01)，IVS、LVPW增加了30.4%、30.0%(P＜0.01)，HW、HW/BW分別增加40.4%、38.1%(P＜0.01)。光鏡下細(xì)胞排列紊亂、細(xì)胞核增大、畸形、染色加深，無(wú)肺水腫。EF、FS、LVEDP、±dp/dtmax較Sham組無(wú)改變。2．苯磺酸氨氯地平治療8周后，SBP、DBP、LVESP較AAC對(duì)照組分別降低24.7%、17.5%、24.8%(P＜0.01)，與Sham組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P

4、＞0.05)；IVS、LVPW、HW、HW/BW較對(duì)照組減少11.5%、10.5%、17.1%、16.2%(P＜0.05)，但仍高于Sham組(P＜0.05)。3．替米沙坦治療8周后，IVS、LVPW、HW、HW/BW較AAC對(duì)照組減少15.5%、16.3%、31.7%、33.3%(P＜0.05)，與Sham組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；SBP、DBP、LVESP較AAC對(duì)照組降低20.4%、15.4%、22.0%(P＜0.01)

5、，但仍高于Sham組(P＜0.05)。4．替米沙坦減輕HW、HW/BW作用較苯磺酸氨氯地平強(qiáng)(P＜0.05)。
　　 [結(jié)論]AAC大鼠高血壓LVH模型成功；替米沙坦、苯磺酸氨氯地平均可降低AAC大鼠血壓、減輕LVH;在降壓幅度相近的情況下，替米沙坦預(yù)防LVH作用較苯磺酸氨氯地平更強(qiáng)些。
　　 第二部分：腹主動(dòng)脈縮窄大鼠左室肥厚差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究
　　 [目的]運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)探討腹主動(dòng)脈縮窄(AAC)高血壓大

6、鼠左室肥厚(LVH)差異蛋白質(zhì)表達(dá)及其在LVH發(fā)生中的作用。
　　 [方法]8周齡SD大鼠隨機(jī)分為AAC組及Sham組，9周后對(duì)二組心肌組織行雙向電泳(2-DE)找出差異點(diǎn)，并進(jìn)行MALDI-TOF-MS質(zhì)譜鑒定，部分蛋白質(zhì)應(yīng)用Western-blot驗(yàn)證。
　　 [結(jié)果]1．AAC組與Sham組膠圖總蛋白點(diǎn)數(shù)分別為916±66、914±37，組內(nèi)膠圖蛋白點(diǎn)平均匹配率90.3%，組間膠圖蛋白點(diǎn)平均匹配率86.1%。2.2

7、-DE中以濃度相差2倍以上為差異點(diǎn)(P＜0.05)，AAC組相對(duì)于Sham組有35個(gè)差異點(diǎn)，其中17個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)上調(diào)，8個(gè)下調(diào),5個(gè)為AAC組新出現(xiàn),5個(gè)在AAC組消失。3．MOLDI-TOF-MS鑒定的21個(gè)差異蛋白點(diǎn)中，AAC組相對(duì)于Sham有14個(gè)蛋白點(diǎn)上調(diào),4個(gè)下調(diào),3個(gè)為AAC組新出現(xiàn)。上調(diào)蛋白點(diǎn)為：肌球蛋白輕鏈2單體、肌球蛋白輕鏈4、肌球蛋白、心肌α肌動(dòng)蛋白1蛋白原、β肌球蛋白重鏈，肌球蛋白重鏈5（結(jié)構(gòu)蛋白）；3磷酸甘油醛脫

8、氫酶（糖酵解）；G蛋白耦聯(lián)受體34，酪氨酸蛋白激酶ZAP-70、組蛋白去甲基化結(jié)構(gòu)域1A單體（信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)）；RIKENcDNA9030617003、天冬氨酰tRNA合成酶、線粒體核糖體蛋白L15（基因表達(dá)調(diào)控）；zeroβ珠蛋白（功能不詳）。下調(diào)蛋白為：L-3脂酰輔酶A脫氫酶、H+轉(zhuǎn)運(yùn)ATP合成酶、ATP合成酶、ATP合成酶β亞單位（脂肪酸β氧化及能量合成）。LVH組新出現(xiàn)的蛋白：α羥丁酸脫氫酶（能量代謝）；IQmotif and ubi

9、quitin結(jié)構(gòu)域（信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)）；未命名蛋白。4.21個(gè)差異蛋白點(diǎn)中，參與細(xì)胞結(jié)構(gòu)6個(gè)(28.5%)、能量代謝6個(gè)(28.5%)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)4個(gè)(19.0%)、翻譯修飾3個(gè)(14.50)、未知2個(gè)(9.5%)。
　　 [結(jié)論]AAC左室肥厚大鼠心肌中參與糖酵解、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、基因表達(dá)調(diào)控、細(xì)胞結(jié)構(gòu)的蛋白增加，參與脂肪酸β氧化及能量合成的蛋白減少。
　　 第三部分：替米沙坦及苯磺酸氨氯地平預(yù)防LVH差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究
　

10、　 [目的]運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)探討替米沙坦與苯璜酸氨氯地平在預(yù)防左室肥厚(LVH)中的差異蛋白質(zhì)表達(dá)及其作用。
　　 [方法]8周齡SD雄性大鼠隨機(jī)行腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)(AAC)及假手術(shù)(Sham)，術(shù)后1周AAC組大鼠隨機(jī)分為替米沙坦組、苯磺酸氨氯地平組及AAC對(duì)照組，前兩組分別給予替米沙坦5mg/kg/day、苯磺酸氨氯地平5mg/kg/day組共8周，給藥前及處死前均行超聲心動(dòng)圖、尾套法測(cè)壓、血流動(dòng)力學(xué)及病理學(xué)檢查。四組心肌

11、組織行雙向電泳(2-DE)找出與LVH相關(guān)的差異蛋白點(diǎn)，MALDI-TOF-MS質(zhì)譜鑒定，部分蛋白進(jìn)行Western-blot驗(yàn)證。
　　 [結(jié)果]在LVH相關(guān)21個(gè)差異蛋白點(diǎn)申，替米沙坦組相對(duì)于AAC對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的蛋白共13個(gè)，其中下調(diào)蛋白為：zeroβ珠蛋白、肌球蛋白、心肌α肌動(dòng)蛋白1蛋白原、β肌球蛋白重鏈、肌球蛋白輕鏈2單體、3磷酸甘油醛脫氫酶、天冬氨酰tRNA合成酶、G蛋白耦聯(lián)受體34、酪氨酸蛋白激酶ZAP-70。

12、上調(diào)蛋白為H+轉(zhuǎn)運(yùn)ATP合成酶、L-3脂酰輔酶A脫氫酶、ATP合成酶、ATP合成酶β亞單位。苯磺酸氨氯地平組相對(duì)于AAC對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異地蛋白共8個(gè)差，下調(diào)蛋白為：心肌α肌動(dòng)蛋白1蛋白原、β肌球蛋白重鏈、3磷酸甘油醛脫氫酶，天冬氨酰tRNA合成酶。上調(diào)蛋白為H+轉(zhuǎn)運(yùn)ATP合成酶、L-3脂酰輔酶A脫氫酶、ATP合成酶、ATP合成酶β亞單位。Western-blot結(jié)果提示：myosin light chain 2在AAC對(duì)照組及苯磺酸氨

13、氯地平組表達(dá)增加，分別為Sham組的1.98倍、1.70倍(P＜0.05)，兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。替米沙坦組為Sham組的1.37倍，但比AAC對(duì)照組減少了44%(P＜0.05)。
　　 [結(jié)論]替米沙坦通過(guò)降低心肌中參與糖酵解、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、轉(zhuǎn)錄翻譯、心肌結(jié)構(gòu)的蛋白表達(dá)，減輕心肌肥厚。苯磺酸氨氯地平通過(guò)降低參與糖酵解、轉(zhuǎn)錄翻譯蛋白、上調(diào)ATP合成蛋白，最終減少部分心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白，一定程度上減輕心肌肥厚，兩種藥物