同種異形抗原特異性iTreg預防小鼠GVHD保持GVL及其作用機理.pdf

1、目的：GVHD是造血干細胞移植最嚴重也最常見的并發(fā)癥。天然形成的調節(jié)T細胞(nTreg)能預防GVHD，但是nTreg的數(shù)量有限及其非選擇性抑制大大阻礙了nTreg在臨床上的應用。為了解決這些難題，我們選擇了另一種方式即生成抗原特異性iTreg，并在臨床前期骨髓移植模型上測試他們預防GVHD的有效性和選擇性，同時觀察了其對GVL效應的影響。
　　方法：選擇HY為目標抗原，因為HY是Y染色體編碼，自然形成、在組織中廣泛表達的次要組織

2、相容性抗原，并被證明HY抗原在GVHD和GVL上發(fā)揮著重要作用。我們利用抗原提呈細胞結合HY抗原將幼稚T細胞在體外轉化成HY特異性iTreg并體外進行混合淋巴細胞反應測試其抑制功能。然后在小鼠骨髓移植模型上觀察HY特異性iTreg對不同性別受鼠（雌性/雄性）GVHD的效應及其作用機制。為了增加這種方法的臨床應用前景，我們延伸這個研究到同種異基因抗原特異性iTregs。在一定濃度的IL-2、TGFβ、retinoic acid(RA)的條

3、件下，我們在體外用同種異基因小鼠脾臟CD11 chi細胞(DCs)刺激小鼠CD4+CD25-細胞從而誘導生成同種異體抗原特異性iTreg。首先在體外測試其對反應T細胞的抑制功能，然后我們在小鼠同種異基因骨髓移植模型上研究了這些iTregs對GVHD的預防功能和選擇特異性。接著，我們在小鼠異體骨髓移植的同時注入了螢光素酶轉導的淋巴瘤A20細胞從而觀察同種異體抗原特異性iTreg對GVL的影響。最后我們研究了iTregs分離GVHD和GVL

4、的作用機制。
　　結果：⑴在體外可以誘導CD4+CD25-幼稚T細胞生成抗原特異性iTregs。⑵在體外實驗中，在HY抗原刺激的情況下HY抗原特異性iTregs能大大抑制反應細胞的增殖。⑶當Tregs:Teff比例相對較低時，HY抗原特異性iTregs預防雄性受鼠GVHD的發(fā)生，而在雌性受鼠中沒有這種保護作用。⑷HY抗原特異性iTregs在雄性受鼠體內活化擴增，并且抑制肝臟和脾臟中的效應T細胞。⑸在BALB/c小鼠脾臟DCs刺激產

5、生的異體抗原特異性iTregs(BALB/c-iTreg)抑制功能體外實驗中，我們觀察到當被BALB/c異體抗原刺激時，BALB/c-iTregs顯著抑制效應T細胞增殖，但當被FVB（無關）異體抗原刺激時抑制效應大大減低。⑹在B6→BALB/c骨髓移植小鼠模型中，BALB/c-iTreg能顯著延遲受鼠GVHD的發(fā)生并提高該組小鼠長期存活率，相比較B10BR-iTreg對受鼠GVHD的預防作用大大減低。⑺我們還觀察到在B6→BALB/c骨

6、髓移植GVHD/GVL模型中，BALB/c-iTreg組小鼠的長期存活率仍顯著高于Teff組，并且小鼠成像顯示iTreg沒有增加腫瘤復發(fā)。
　　結論：①大量的HY抗原特異性iTregs能在體外被誘導生成，這些iTregs在體外能特異性抑制效應T細胞。我們觀察到在小鼠骨髓移植模型中HY抗原特異性iTregs能減少效應T細胞在受鼠體內的的擴增、活化和浸潤，從而以一種抗原依賴性的方式有效預防GVHD。②成功地在體外將幼稚T細胞誘導轉化成