嚴重燒傷大鼠膈肌核凋亡及胰島素治療對其作用的研究.pdf

1、目的：嚴重燒傷患者往往伴隨呼吸功能障礙，當并發(fā)急性呼吸功能衰竭時治療效果差，是燒傷早期的主要死因。膈肌是呼吸功能的主要動力來源，呼吸肌萎縮則對呼吸功能有重要影響。既往研究表明，骨骼肌核凋亡是嚴重燒傷后四肢骨骼肌萎縮的重要機制之一，同時胰島素對四肢骨骼肌凋亡起到部分抑制作用。本研究擬在此基礎上探討嚴重燒傷后膈肌萎縮、核凋亡情況;死亡受體通路在膈肌核凋亡中扮演的角色;胰島素治療對嚴重燒傷后膈肌肌萎縮和核凋亡的影響。
　　 方法：12

2、0只雄性Wistar大鼠隨機分3組:(1)假傷組(n=40)(2)嚴重燒傷組（40％TBSA大鼠燙傷模型）(n=40)(3)嚴重燒傷+胰島素治療組（于傷后24小時開始皮下給予胰島素，每12小時一次，連續(xù)五天，劑量每日遞增，分別為0.25，0.5，0.75，1.0，1.25U/100g/次）(n=40)分別在傷后0、1、4、7、10天每組每次8只大鼠，取外周靜脈血測血糖、取腹主動脈血和完整膈肌。嚴重燒傷+胰島素治療組取標本時間為胰島素注射

3、后8分鐘。使用投射電鏡(TEM)觀察膈肌凋亡超微結構;使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清sFas、sFasL、sTRAIL及血清胰島素水平;使用Roche血糖儀檢測血糖水平;使用Western blot檢測膈肌Akt、磷酸化Akt、Bax、Bcl-2、caspase-8、caspase-3蛋白表達水平。
　　 結果：①嚴重燒傷后大鼠體重明顯降低，膈肌重量也顯著下降，胰島素治療后可改善大鼠體重和膈肌重量的減輕；②透射電鏡(

4、TEM)觀察到膈肌胞膜氣泡，胞質濃縮，線粒體腫脹等典型凋亡現(xiàn)象，而對照組則未觀察到核凋亡現(xiàn)象；③嚴重燒傷組大鼠于傷后48小時出現(xiàn)應激性高血糖，整體血糖在8mmol/L波動，血清胰島素水平較假傷組顯著降低，胰島素治療組大鼠血糖在治療期間血糖波動于5mmol/L，血清胰島素在治療期間較假傷組和燒傷組顯著增高；④燒傷組血清sFas/sFasL先迅速下降后緩慢上升，治療組血清sFas/sFasL先下降后迅速上升至正常水平，血清sTRAIL則是同

5、時間點胰島素治療組高于燒傷組高于假傷組；⑤Western Blot結果，燒傷組第1、4天p-Akt明顯下降，Bax/Bcl-2于第1、4、7天明顯上升，剪切體caspas-8在第1、4天表達明顯增加;治療組第1、4天p-Akt明顯上升，Bax/Bcl-2僅在第1天有所上升，caspas-8僅在第4天有所增加;胰島素治療組與燒傷組對應時間點比較，治療組剪切體caspas-3在傷后第1、4天顯著下降。
　　 結論：⑴嚴重燒傷大鼠體重

6、明顯下降，同時膈肌發(fā)生萎縮，血糖升高，產生胰島素抵抗，胰島素可減輕該膈肌萎縮，減輕胰島素抵抗（肌肉重量改變，血清胰島素和血糖變化）；⑵透射電鏡(TEM)下觀察到燒傷后膈肌肌細胞發(fā)生典型核凋亡現(xiàn)象，提示凋亡是膈肌萎縮的重要原因；⑶報道了死亡受體通路參與了燒傷后膈肌核凋亡:sTRAIL，caspas-8、caspas-3表達升高，sFas/sFasL下降，同時一些凋亡調節(jié)信號分子Bax/Bcl-2升高，胰島素信號通路受到抑制(p-Akt明顯