嚴重?zé)齻笫蠊趋兰〉蛲黾耙葝u素治療對其作用的研究.pdf

1、目的：嚴重?zé)齻蠊趋兰∥s可引起許多并發(fā)癥，嚴重影響患者的治療、康復(fù)及預(yù)后。我們以前的研究表明，骨骼肌蛋白降解增強是燒傷后骨骼肌萎縮的重要原因。然而最近的研究表明，細胞凋亡通路的激活在骨骼肌萎縮過程中具有重要作用并且發(fā)生在骨骼肌蛋白降解之前，而且線粒體功能失常和細胞凋亡通路失調(diào)已被認為是老年因素等引起的骨骼肌萎縮發(fā)生、發(fā)展的機制。本研究擬進一步探討嚴重?zé)齻蠊趋兰〉蛲龅陌l(fā)生、成肌細胞增殖活性的改變以及它們與骨骼肌萎縮的關(guān)系；燒傷后骨骼肌

2、凋亡的可能機制；胰島素對燒傷后骨骼肌凋亡的抑制作用及其機制。為了避免熱力損傷對骨骼肌的直接作用，并能更好地理解燒傷后全身系統(tǒng)反應(yīng)對骨骼肌的作用，我們選取遠離燒傷部位的脛骨前肌作為研究對象。
　　 方法：雄性Wistar大鼠180只，隨機分為3組：(1)假傷組；(2)嚴重?zé)齻M制作40％TBSA大鼠燙傷模型；(3)燒傷+胰島素治療組從燒傷后24小時開始，每隔12小時皮下注射胰島素1次，持續(xù)5天(劑量逐日遞增，分別為0.25，0.5

3、，0.75，1.0，1.25 U/100g/次)。于傷后0、1、4、7、10、14天麻醉大鼠，麻醉前夜禁食，腹主動脈抽血并分離切取脛骨前肌及趾長伸肌并稱重。胰島素治療組取標本時間為胰島素注射后8分鐘。骨骼肌凋亡的超微結(jié)構(gòu)采用透射電鏡(TEM)檢測；骨骼肌凋亡的原位檢測采用TdT酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標記技術(shù)(TUNEL)；骨骼肌凋亡的定量及血清TNF-α、sFas、sFasL水平采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測；血清胰島素水平采

4、用放射免疫學(xué)方法進行檢測；血糖水平采用Roche血糖儀進行檢測；骨骼肌凋亡相關(guān)基因的表達采用實時定量PCR芯片進行檢測；骨骼肌中Akt(蛋白激酶B)及磷酸化Akt、Bax、Bcl-2、Apaf-1和caspase-3蛋白表達水平采用Western blot方法進行檢測；骨骼肌caspase-3、caspase-8、caspase-9活性水平采用相應(yīng)試劑盒通過比色法或化學(xué)發(fā)光法進行檢測。
　　 結(jié)果：
　　 1.嚴重?zé)齻?/p>

5、引起大鼠體重明顯降低，脛骨前肌和趾長伸肌的肌肉重量下降、肌肉重量與體重比值減小。
　　 2.嚴重?zé)齻蟠笫竺劰乔凹〕杉〖毎鲋郴钚?PCNA表達)明顯降低，但經(jīng)線性相關(guān)分析未發(fā)現(xiàn)與肌肉重量有顯著相關(guān)。
　　 3.嚴重?zé)齻蟠笫竺劰乔凹〈嬖诩『说蛲霈F(xiàn)象，經(jīng)線性相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)脛骨前肌凋亡指數(shù)與肌肉重量呈顯著負相關(guān)。
　　 4.嚴重?zé)齻笱錞NF-α迅速升高并逐漸下降，隨后血清sFasL與sFas比值升高。
　

6、　 5.嚴重?zé)齻笏劳鍪荏w通路中的促凋亡信號分子，包括TNF-α、FasL、Tnfrsfla、Tnfrsflb、Tnfsf6、Fadd、caspase-3、caspase-6和caspase-8均表達增高或活性增強。
　　 6.嚴重?zé)齻缶€粒體通路中的促凋亡分子Bax、Bid、Apaf-1和caspase-9表達或活性增強，而抗凋亡分子Bnip1表達下調(diào)。另外抗凋亡基因Bcl211和Mcl1等表達也上調(diào)。
　　 7.嚴

7、重?zé)齻笃渌盘柾分械拇俚蛲龇肿樱鏕add45a、Cidea、Dapk1表達上調(diào)，同時部分抗凋亡基因ARC/Nol-3、IL-10、prokineticin-2也表達上調(diào)。
　　 8.胰島素治療可部分抑制燒傷引起的脛骨前肌凋亡增加。
　　 9.胰島素治療后燒傷大鼠脛骨前肌胰島素信號通路中的核心信號蛋白Akt磷酸化水平顯著升高，血清胰島素水平升高。
　　 10.胰島素治療后燒傷大鼠血清TNF-α及sFasL和s

8、Fas比值下降。11.胰島素治療后，燒傷大鼠骨骼肌促凋亡分子包括TNF受體超家族中的Traf1，Bcl-2家族中的Bid3，caspase家族中的caspase-3和caspase-6，CARD家族中的Card6、Dapk1和Cidea基因/蛋白表達或活性水平下降。同時抗凋亡基因Prok2表達也下調(diào)。
　　 結(jié)論：
　　 1.嚴重?zé)齻蟠嬖诠趋兰『说蛲霈F(xiàn)象，它是燒傷后骨骼肌萎縮的重要原因。
　　 2.嚴重?zé)齻蠊?/p>

9、骼肌成肌細胞增殖活性下降，但它可能不是骨骼肌萎縮的主要原因。
　　 3.嚴重?zé)齻蠊趋兰〉蛲龅臋C制包括外源性通路(死亡受體介導(dǎo)的細胞凋亡信號通路)、內(nèi)源性通路(線粒體介導(dǎo)的細胞凋亡信號通路)以及其它信號通路中與凋亡相關(guān)的分子的活化。
　　 4.胰島素治療可部分抑制燒傷引起的脛骨前肌凋亡增加，其機制是通過激活胰島素信號通路來調(diào)節(jié)包括死亡受體信號通路分子、caspases、Bcl-2家族調(diào)節(jié)蛋白及其它與凋亡相關(guān)的信號分子，從