ABCG2等基因在對培美曲塞耐藥胰腺癌Patu8988細胞中的表達及意義.pdf

1、目的：探討對培美曲塞耐藥胰腺癌Patu8988細胞相對于親本細胞在克隆形成能力及相關(guān)多藥轉(zhuǎn)運耐藥基因的變化。針對其耐藥基因ABCG2，探討尼卡地平在無毒劑量下能否逆轉(zhuǎn)耐藥，為在臨床上千預腫瘤耐藥提供參考。
　　 方法：采用雙層軟瓊脂克隆實驗檢測對培美曲塞耐藥胰腺癌Patu8988與親本細胞克隆形成能力的差異；RT-PCR法檢測兩者ABCG2、ABCC3、ABCB1的mRNA表達水平，Wersten blot檢測ABCG2租ABC

2、C3的蛋白表達水平；免疫熒光及激光共聚焦檢測耐藥細胞中ABCG2的表達及分布；采用MTT實驗分別檢測單用培美曲塞和聯(lián)合無毒劑量的尼卡地平對兩者IC50的影響；采用DAPI核染色和流式細胞檢測在耐藥細胞中單用與聯(lián)合用藥的凋亡差異。
　　 結(jié)果：對培美曲塞耐藥胰腺癌Patu8988相對于親本細胞克隆形成能力提高。RT-PCR及Wersten blot檢測中顯示ABCG2、ABCC3在耐藥細胞中mRNA及蛋白表達提高較多，ABCB1

3、mRNA表達提高較少。免疫熒光實驗顯示耐藥細胞中ABCG2的熒光強度增強，激光共聚焦實驗顯示耐藥細胞中ABCG2主要分布于細胞膜、胞漿內(nèi)也有少量分布。MTT實驗顯示尼卡地平在濃度<2.5μg/mL（4.85μmol/L）時對兩種細胞基本無毒性作用；聯(lián)合培美曲塞與2.5μg/mL，濃度的尼卡地平作用48小時，相對于單用培美曲塞，親本細胞的IC50無明顯變化，而耐藥細胞IC50的降低有統(tǒng)計學意義。DAPI核染色和流式細胞凋亡實驗顯示在耐藥細