吉西他濱調(diào)節(jié)胰腺癌細胞ABCG2膜表達誘導耐藥機制研究.pdf

1、胰腺癌是一種惡性程度極高，預后極差的惡性腫瘤。美國的統(tǒng)計結(jié)果顯示，由癌癥引發(fā)的死亡中，胰腺癌排第四位，5年生存率只有5％-6％。除傳統(tǒng)手術(shù)治療外，吉西他濱化療是治療胰腺癌的主要輔助手段。但應用吉西他濱對病人實行化療在提高生存率方面僅有輕微的作用，胰腺癌病人的病情仍在不斷惡化，這主要是由腫瘤先天或者獲得性的耐藥機制導致的，尤其是獲得性耐藥，然而目前在其他腫瘤中發(fā)現(xiàn)的耐藥機制可能不是導致胰腺癌高水平耐藥的主要原因。因此尋找新的胰腺癌耐藥機制

2、對于胰腺癌的治療非常重要。近些年已經(jīng)有一些研究把抗凋亡PI3K/Akt信號通路和胰腺癌細胞系的耐藥性聯(lián)系到了一起;乳腺癌耐藥蛋白(BCRP/ABCG2)也被發(fā)現(xiàn)可能在多種腫瘤中與腫瘤產(chǎn)生耐藥性相關(guān)。
　　目的:探究PI3K/Akt信號通路與ABCG2跨膜轉(zhuǎn)運蛋白在胰腺癌細胞產(chǎn)生吉西他濱(Gem)耐藥性過程中的影響及其作用機制。
　　方法:本實驗首先通過免疫組化的方法檢測跨膜轉(zhuǎn)運蛋白ABCG2在胰腺癌組織及癌旁組織的表達情況。

3、三株胰腺癌細胞系SW1990、Capan-2、PANC-1通過CCK-8的方法檢測其對吉西他濱的耐藥性，用生存率及半數(shù)抑制濃度(IC50)表示。通過免疫印跡的方式檢測三株細胞ABCG2蛋白總量的表達差異以及經(jīng)Gem處理以后P-Akt、P-Paxillin表達量的改變，流式細胞方法檢測用化療藥后細胞表面ABCG2表達量的改變。隨后用LY294002作為PI3K/Akt信號通路抑制劑，外源阻斷該通路以及用siRNA內(nèi)源沉默Akt2基因后檢測

4、三株細胞系使用Gem處理后的生存率、細胞表面ABCG2以及總蛋白ABCG2表達變化。最終通過免疫熒光共聚焦技術(shù)檢測PI3K/Akt信號通路影響ABCG2蛋白導致胰腺癌細胞產(chǎn)生對Gem耐藥的分子機制。
　　結(jié)果:ABCG2在胰腺癌組織及癌旁組織高表達，且在癌組織表達量高于癌旁組織。三株胰腺癌細胞系SW1990、Capan-2、PANC-1的耐藥性不同，PANC-1IC50值最高，SW1990最低，與ABCG2蛋白細胞膜表達水平一致，

5、而ABCG2總蛋白表達水平卻為Capan-2最高，PANC-1最低，而且三株細胞系膜表面ABCG2表達水平均隨著Gem處理時間的增長而增加。使用Gem處理細胞后，細胞內(nèi)P-Akt、P-Paxillin表達量上升。LY294002抑制PI3K/Akt信號通路以及siRNA內(nèi)源沉默Akt2后細胞對于Gem的耐受性降低，細胞膜表面ABCG2表達水平較單獨Gem處理組降低，而ABCG2總蛋白表達量不變。免疫熒光共聚焦結(jié)果顯示ABCG2特異性定位

6、于細胞質(zhì)與細胞膜，使用Gem處理細胞后細胞膜表面ABCG2表達量上升，LY294002預處理后ABCG2定位發(fā)生明顯改變，由細胞膜向細胞質(zhì)轉(zhuǎn)移。
　　結(jié)論:在體外細胞水平，胰腺癌細胞對吉西他濱耐藥性差異較大，且差異性與細胞膜表面ABCG2表達水平相關(guān)與ABCG2總蛋白表達水平無直接關(guān)系;抑制PI3K/Akt信號通路可以一定程度上增強胰腺癌細胞化療敏感性;PI3K/Akt信號通路可能通過改變ABCG2蛋白定位情況調(diào)節(jié)胰腺癌細胞對Ge