溫敏性氯化殼聚糖水凝膠增強(qiáng)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞治療急性腎損傷的療效.pdf

1、目的：間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）已經(jīng)被認(rèn)為是一種非常有潛力的干細(xì)胞移植治療急性腎損傷（AKI）。然而這種治療的療效受限于移植的MSCs在靶向區(qū)域的低滯留率和低存活率。溫敏性氯化殼聚糖（CSCI）水凝膠作為一種可注射性支架材料，具有良好的生物相容性和可降解性，已經(jīng)被廣泛的用于各種組織工程中。在本項(xiàng)研究中，CSCI水凝膠作為可注射性支架傳遞脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（ADMSCs）移植治療缺血再灌注（I/R）引起的急性腎損傷（AKI）。
　　材料

2、和方法體外：分離和培養(yǎng)大鼠ADMSCs并鑒定其表型，攜帶有熒光素酶-紅色熒光蛋白（fluc-mrfp）報(bào)告基因的慢病毒轉(zhuǎn)染ADMSCs,并鑒定fluc-mrfp兩種報(bào)告基因的表達(dá)以及轉(zhuǎn)染后ADMSCs的成脂、成骨分化能力；制備溫敏性CSCI水凝膠，Live/Dead染色檢測(cè)CSCI水凝膠與ADMSCs的細(xì)胞相容性。體內(nèi)：構(gòu)建成年SD大鼠（150-200g）的缺血再灌注損傷的AKI模型，溫敏性CSCI水凝膠攜帶或不攜帶ADMSCs注射到大

3、鼠AKI模型中。DHE染色用來檢測(cè)體內(nèi)活性氧（ROS）的水平。為了示蹤移植體內(nèi)的ADMSCs,使用活體生物發(fā)光成像儀（BLI）檢測(cè)（fluc-mrfp）標(biāo)記的ADMSCs在大鼠腎臟內(nèi)的滯留和存活情況。HE染色及血清肌酐（CRE）和尿素氮（BUN）水平用來檢測(cè)腎臟的損傷和腎功能恢復(fù)情況。免疫熒光染色用來研究ADMSCs在體內(nèi)的分化情況。宿主腎臟細(xì)胞的增殖和凋亡使用PCNA染色和TUNEL染色法。
　　結(jié)果：體外：ADMSCs呈長(zhǎng)梭形

4、，流式細(xì)胞儀示：CD29,CD90表達(dá)陽(yáng)性，CD34，CD45,CD31表達(dá)陰性。慢病毒轉(zhuǎn)染后的ADMSCs表達(dá)fluc-mrfp報(bào)告基因，并且仍具有成脂、成骨分化的能力。Live/Dead染色證實(shí)CSCI水凝膠和ADMSCs復(fù)合后具有良好的細(xì)胞相容性。體內(nèi)：CSCI水凝膠可以明顯改善AKI的微環(huán)境通過降低ROS水平。同時(shí)CSCI水凝膠可以改善移植的ADMSCs在腎臟內(nèi)的滯留和存活,而且CSCI水凝膠可以增強(qiáng)宿主腎臟細(xì)胞的增殖活力并減少