骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療急性放射性腸道損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分：SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)、純化及其生物學(xué)特性鑒定的研究
　　 目的：探討SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 （Bone Marrow-derived MesenchymAlSstem Cells，BMSCs）體外分離、 純化和培養(yǎng)方法，并鑒定其生物學(xué)特性，建立起理想的大鼠BMSCs體外分離培養(yǎng)體系，為 BMSCs實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：取4-6周齡的雄性SD大鼠，無菌條件下分離大鼠后肢，PBS沖洗骨

2、髓腔，收集骨髓。聯(lián)合運(yùn)用密度梯度離心法和全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離、純化和培養(yǎng)SD大鼠BMSCs。光鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、采用MTT法繪制細(xì)胞生長曲線、應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞表面標(biāo)記，并檢測BMSCs向成骨、成脂肪細(xì)胞分化的潛能。
　　 結(jié)果：顯微鏡下體外分離培養(yǎng)的SD大鼠BMSCs呈梭形、成纖維細(xì)胞樣形態(tài)，大小均一，漩渦狀生長。細(xì)胞生長曲線呈“S”形。P3代SD大鼠BMSCs純度達(dá)98％以上；細(xì)胞表面表達(dá)CD44、CD90等抗原分

3、子，不表達(dá)CD34抗原。誘導(dǎo)P3代BMSCs可向成骨細(xì)胞及成脂肪細(xì)胞分化。
　　 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)建立起了一種理想的大鼠BMSCs體外分離培養(yǎng)體系。根據(jù)這種方法培養(yǎng)出的大鼠BMSCs純度高、生物學(xué)特征穩(wěn)定，可用于對BMSCs的實(shí)驗(yàn)研究。
　　 第二部分：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療急性放射性腸道損傷的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的：觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對急性放射性腸道損傷的修復(fù)作用，并探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可能的歸巢機(jī)制，為臨床放射性腸

4、道損傷的患者治療提供新的思路。
　　 方法：30只雌性SD大鼠隨機(jī)分為2組（各15只），即對照組與實(shí)驗(yàn)組（BMSCs治療組）。兩組均接受醫(yī)用直線加速器單次12 Gy的全腹部照射。BMSCs治療組于照射后4小時內(nèi)尾靜脈輸注2×106/ml的雄性SD大鼠BMSCs懸液1ml；對照組于照射后4小時內(nèi)尾靜脈輸注生理鹽水1ml。照射后第3天、14天每組隨機(jī)選取6只大鼠處死，留取血漿與末端回腸標(biāo)本。用ELISA方法檢測血漿中瓜氨酸的含量；光

5、鏡下觀察腸道組織結(jié)構(gòu)的變化；免疫組化SP法測定腸道組織趨化因子細(xì)胞基質(zhì)衍生蛋白-1（SDF-1）的表達(dá)；提取腸組織DNA，用PCR方法檢測雌性受鼠腸內(nèi)Y染色體的Sry基因，確定供鼠BMSCs的植入情況。
　　 結(jié)果：照射后第3天，與對照組大鼠相比， BMSCs治療組光鏡下回腸粘膜上皮細(xì)胞壞死和炎性細(xì)胞浸潤較少，絨毛及腺體數(shù)量較多。照射后第14天，與對照組大鼠相比，BMSCs治療組回腸粘膜結(jié)構(gòu)完整，粘膜絨毛及固有腺體更豐富。照射后

6、第3，14天，BMSCs治療組回腸絨毛高度分別為(245.54±12.75)μm、 (321.36±18.21)μm；高于對照組 (215.46±13.52)μm、(303.3±16.65)μm，P<0.05。BMSCs治療組回腸隱窩深度分別為(148.82±10.12)μm、(204.25±13.58)μm；高于對照組(132.72±11.96)μm、(192.5±12.23)μm， P<0.05。照射后第3、14天，BMSCs治療組

7、大鼠血漿瓜氨酸分別為(11.32±1.42)μg/ml、（17.66±2.39）μg/ml，高于對照組(9.15±1.56)μg/ml、(14.48±2.10)μg/ml， P<0.05。照射后第3天，兩組大鼠回腸組織細(xì)胞基質(zhì)衍生蛋白-1表達(dá)陽性，且BMSCs治療組表達(dá)量明顯高于對照組，P<0.05。PCR檢測BMSCs治療組大鼠回腸組織有Y染色體特異性基因片段的存在。而檢測對照組各大鼠此基因片段均為陰性，證實(shí)雄性大鼠BMSCs參與了受