奧卡西平對戊四氮致癇未成年大鼠認知功能的保護作用.pdf

1、目的： 癲癇(epilepsy，EP)系腦神經元過度放電而引起的反復發(fā)作性腦功能障礙。在癲癇患者中，認知功能的損害很常見。較成人而言，兒童由于興奮性和抑制性機制在未成熟大腦中遠未達到平衡，不僅更易患癲癇，而且更易發(fā)生認知功能障礙。認知功能障礙發(fā)生與否及其損害程度和多種因素有關，如起病年齡、發(fā)病類型、病程長短及頻發(fā)程度、抗癲癇藥物的長期應用等。由于抗癲癇藥物(antiepileptic drugs，AEDs)是目前治療癲癇的首選方

2、法，而且用藥是一個長期的過程，所以AEDs對認知功能的損害受到特別關注。已有研究表明，傳統(tǒng)的AEDs如苯妥英鈉(phenytoin，PHT)、氯硝安定(clonazepam，CZP)和苯巴比妥(Phenobarbital，PB，商品名：魯米那)等，對癲癇患者的認知功能均有不同程度的損害作用。奧卡西平(oxcabazepine，OXC)是2004年國家食品藥品監(jiān)督管理局批準進口使用的一種新型抗癲癇藥物，關于其對認知功能的影響國內未見報道，

3、國外相關研究也較少。為了盡可能減小AEDs對癲癇患兒認知功能的損害，科學評價OXC對認知功能的影響，我們采取動物實驗的方法，利用戊四氮(pentylenetetrazole，PTZ)腹腔注射建立癲癇未成年大鼠模型，并描記腦電圖(electroencephalogram，EEG)，致癇大鼠共分三組，分別給予OXC、PB和生理鹽水灌胃，在實驗的三個階段觀察致癇后腦組織細胞形態(tài)學的改變，并通過Morris水迷宮試驗(Morris water

4、maze test，MWMT)評價各組大鼠認知功能的變化，和未致癇大鼠相對照。水迷宮試驗之前通過開闊場地活動性試驗(open field test.OFT)、斜板試驗(inclined plane test，IPT)和懸吊試驗(over hanging test，OHT)進行情感運動能力檢測，以排除因情感運動方面的差異所導致的實驗誤差，從而探討OXC對癲癇未成年大鼠認知功能的影響，為其合理的臨床選用提供理論依據。 方法：

5、 1 造模 健康三周齡雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠50只，體重50±10g，適應性飼養(yǎng)1周后，經過三次水迷宮定位航行試驗篩選，合格者進行模型制備。篩選后獲得合格動物45只，將實驗大鼠按水迷宮定位航行成績隨機分成六組：正常對照組(Control)6只、正常魯米那組(PB)6只、正常奧卡西平組(OXC)6只、致癇組(EP)12只、致癇后魯米那組(EP+PB)6只、致癇后奧卡西平組(EP+OXC)6只。制模過程中大鼠

6、出現死亡或不符合模型要求者，予以剔除并隨機補充，保證每組數量。EP組分為a、b兩個小組：a組(6只)用于認知功能檢測；b組(6只)用于組織細胞形態(tài)學觀察。 EP模型：對EP、EP+PB、EP+OXC三個癲癇模型組大鼠分別按60mg/kg/天腹腔注射PTZ溶液，連續(xù)5天，按Racine標準達Ⅳ-Ⅴ級的大鼠視為誘發(fā)成功；同時，對Control、PB、OXC三個非癲癇模型組大鼠分別每天腹腔注射等量生理鹽水，連續(xù)5天。 2 灌胃

7、致癇后滿24小時開始，對OXC、EP+OXC兩組大鼠每天給予OXC 80mg/kg灌胃；對PB、EP+PB兩組大鼠每天給予PB 50mg/kg灌胃；對Control、EP兩組大鼠每天給予生理鹽水灌胃。 3 標本制作 每次認知功能檢測之前，取EP組的b小組中任意兩只大鼠進行麻醉、固定液灌注、斷頭取腦、組織切片和HE染色等處理，于光學纖維鏡下觀察組織細胞形態(tài)學的改變。 4 認知功能及情感運動能力檢測在致癇后滿24小

8、時和喂藥7天兩個時間節(jié)點上，分別進行情感運動能力檢測，包括：開闊場地活動性試驗、斜板試驗和懸吊試驗；在喂藥4～7天、11～14天、18～21天三個時間段中，分別進行連續(xù)4天的，Moms水迷宮試驗，其中：第1～2天為定位航行試驗(place navigation test，PNT)，共包括五個系列，第3天為空間探索試驗(spatialprobe test，SPT)，第4天為工作記憶試驗(work memorytest，WMT)。

9、 5 EEG 認知功能檢測完畢后，從非癲癇模型組和癲癇模型組中各選取2～3只大鼠進行腦電圖描記。將大鼠麻醉后固定于腦立體定位儀上，放置雙側皮質和雙側海馬電極，待大鼠清醒后，對非癲癇模型組描記正常腦電圖，對癲癇模型組按上述劑量給予PTZ腹腔注射制模成功后，描記癲癇腦電圖。 結果： 1 癲癇行為學 各癲癇模型組大鼠均出現不同程度的癇性發(fā)作，造模成功。 2 組織細胞形態(tài)學觀察光學纖維鏡下，癲癇大鼠的海

10、馬神經元發(fā)生變性壞死。隨著時間的延長，壞死細胞的數量逐漸減少。 3 認知功能及情感運動能力檢測 3.1情感運動能力檢測在致癇后滿24小時、喂藥7天兩個時間節(jié)點上，EP、EP+PB和EP+OXC三個癲癇模型組大鼠場地活動的格子數、直立次數、糞便顆粒、轉體能力和懸吊能力與正常對照組相比均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。 3.2 Morris水迷宮試驗 3.2.1 PNT第1階段試驗(喂藥4～5天)：共5個系列

11、試驗。其中，EP組在第1系列試驗中，尋找平臺的潛伏期較對照組延長，差異有顯著性(P<0.05)； EP+PB組在第1、2系列試驗中，尋找平臺的潛伏期較對照組延長，差異有顯著性(P分別<0.05、<0.01)；其余各組在5個系列試驗中的成績與對照組相比均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。對學習進度的統(tǒng)計中，只有EP+PB組成績較對照組差，差異有顯著性(P<0.05)。 第2、3階段試驗(喂藥11～12天、喂藥18～19天)：兩階段試

12、驗結果相同，即：在5個系列試驗中，各組尋找平臺的潛伏期比較均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。對學習進度的統(tǒng)計中，只有EP+PB組成績較對照組差，差異有顯著性(P<0.05)。 3.2.2 SPT第1階段試驗(喂藥6天)：EP組和EP+PB組在平臺所在象限停留的時間較對照組縮短，差異有顯著性(P<0.05)，其余各組與對照組相比無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。 第2、3階段試驗(喂藥13天、喂藥20天)：兩階段試驗結果相同，

13、即：只有。EP+PB組在平臺所在象限停留的時間較對照組縮短，差異有顯著性(P<0.05)。 3.2.3 WMT在3個階段試驗中(喂藥7天、14天、21天)，各組尋找平臺的潛伏期與對照組相比均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。 4 EEG 癲癇模型組大鼠腦電圖顯示典型的尖.慢波、尖波和棘波發(fā)放。非癲癇模型組大鼠腦電圖無異常改變。 結論： 1、癲癇發(fā)作可導致大鼠海馬神經元變性壞死。 2、癲癇不

14、影響未成年大鼠的情感運動，但可導致其認知功能一過性受損，主要體現在空間定位和長時記憶能力上，而學習進度和短時記憶能力無明顯受損表現。 3、PB可導致PTZ致癇未成年大鼠的學習進度和長時記憶能力受損，對短時記憶能力影響不明顯；正常未成年大鼠服用PB后的認知功能無明顯受損表現。 4、OXC對PTZ致癇未成年大鼠早期(即神經元變性壞死較明顯時)的認知功能損傷(主要體現在空間定位和長時記憶能力上)有一定的改善作用；正常未成年大鼠