神經(jīng)生長因子對神經(jīng)干細胞增殖、分化和凋亡的影響.pdf

1、鄭州大學碩士學位論文神經(jīng)生長因子對神經(jīng)干細胞增殖、分化和凋亡的影響姓名：孫劍瑞申請學位級別：碩士專業(yè)：神經(jīng)外科指導教師：楊波20050501鄭州大學2005屆碩士研究生畢業(yè)論文(摘要)神經(jīng)生長因予對神經(jīng)干細胞增殖、分化和凋亡的影響細胞，密度為5X105個／m]，接種于培養(yǎng)板中，分組如下：加入堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)作為陽性對照組：實驗組培養(yǎng)液中分別加入不同濃度NGF；基礎培養(yǎng)液，無添加成分作為空白對照組。分別于第3、10天用二

2、甲基噻唑二苯基四唑溴鹽(MTT)染色，比色分析法測定細胞活力，并計細胞球數(shù)；于第5天行流式細胞檢測細胞凋亡率；于培養(yǎng)第7天，收集培養(yǎng)板中所有細胞，行NSE、GFAP免疫細胞化學染色，計GFAP，NSE陽性細胞比率；向細胞中均加入終濃度5％的胎牛血清，待細胞全部貼壁分化后，收集細胞，行NSE免疫細胞化學染色，計NSE陽性細胞比率。所有資料均用SPSSl00軟件進行數(shù)據(jù)處理，a=005為檢驗水準。結果；I細胞培養(yǎng)8～10d后細胞生長成為數(shù)十

3、到數(shù)百個細胞的懸浮球形克隆，免疫細胞化學Nesfin鑒定陽性。212～18u／ml的DispaseII消化后的細胞經(jīng)培養(yǎng)，可見較多懸浮生長的球形細胞克隆形成，免疫細胞化學Nestin鑒定陽性。3細胞球數(shù)和MTT測定統(tǒng)計結果表明：培養(yǎng)3d時50g／LNGF組增殖較其他各組低，P005，與空白對照組比較有顯著性差異，P005；2嵋?guī)住?0鵬幾、50p班NGF組與陽性對照組比較有顯著性差異，與空白對照組比較無顯著性差異。4隨著NGF濃度的增大

4、，神經(jīng)干細胞分化的比率也呈增高趨勢，差異顯著。分化條件下，NSE(十)細胞比率在5、10、20、50舊LNGF組間無顯著性差異，2pg／LNGF組NSE()細胞比率較其他試驗組低。5流式細胞檢測示細胞凋亡率在2、5、10Ig／LNGF組間變化不明顯，20、50“g，LNGF組細胞凋亡率明顯增高。10嵋／LNGF組細胞增殖指數(shù)(PI)較其他實驗組高。結論：1采用機械法分離人胚腦組織特定區(qū)域(V硝Vz)的細胞，用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)，細胞生長狀