柑橘CitSERK基因克隆、序列分析及其遺傳轉(zhuǎn)化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、植物組織培養(yǎng)中,胚性愈傷組織經(jīng)長期繼代后分化能力能否保持,一直是細胞工程研究中的重要課題。柑橘部分品種的愈傷組織經(jīng)長期繼代后,仍具有很強的體胚發(fā)生能力,但也有一些品種的愈傷組織經(jīng)長期繼代后體胚發(fā)生能力下降,甚至完全喪失體胚發(fā)生能力。從柑橘愈傷組織中克隆控制體胚發(fā)生的基因,對于通過基因工程改良品種、提高轉(zhuǎn)化子的再生具有重要意義。對柑橘體細胞胚胎發(fā)生的研究,有助于進一步揭示柑橘愈傷組織體細胞胚胎發(fā)生的分子調(diào)控機理,同時,也有助于進一步提高柑

2、橘愈傷組織離體種質(zhì)庫用于生物技術(shù)遺傳改良的效率。
　　 本研究以暗柳橙的愈傷組織為實驗材料,利用RT-PCR方法克隆了CitSERK的cDNA全序列,并對其核苷酸序列及其編碼的氨基酸序列進行了生物信息學(xué)分析。同時,還構(gòu)建了CitSERK的正義表達載體和反義表達載體,并進行了遺傳轉(zhuǎn)化。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.提取了暗柳橙愈傷組織的總RNA,所提取的RNA的A260/A280在1.65-1.90之間,A260/A230

3、大于2.0；其質(zhì)量和濃度能夠直接用于其它分子生物學(xué)研究,如RT-PCR圾Northern雜交等實驗。
　　 2.利用RT-PCR方法從暗柳橙愈傷組織中克隆得到CitSERK基因的cDNA全序列,全長1886 bp,并對重組質(zhì)粒DNA進行了PCR檢測和酶切檢測。
　　 3.利用美國國立生物技術(shù)信息中心BLAS工程序、ExPASy和Clustal W軟件進行分析發(fā)現(xiàn),CitSERK基因與已克隆的其它SERK基因具有很高的同源

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