角膜基質(zhì)載體培養(yǎng)的角膜緣干細(xì)胞的增齡性變化及相關(guān)性研究.pdf

1、目的：通過將不同年齡兔角膜緣干細(xì)胞種植于不同年齡兔角膜基質(zhì)載體上，觀察同種異體角膜基質(zhì)載體培養(yǎng)的兔角膜緣干細(xì)胞生物學(xué)特性隨增齡的變化，探討了增齡對在角膜基質(zhì)載體上培養(yǎng)的LSCs增殖能力的影響，同時(shí)檢測了角膜基質(zhì)載體培養(yǎng)的角膜緣干細(xì)胞的相關(guān)性標(biāo)記物△Np63、ABCG2的表達(dá)量隨增齡的變化，探討其與載體培養(yǎng)的干細(xì)胞老化有無關(guān)系，為組織工程化角膜種子細(xì)胞選擇的成因開辟了新途徑。
　　 方法：對照實(shí)驗(yàn)研究。用酶消化法將不同年齡新西蘭兔

2、角膜緣組織制成細(xì)胞懸液培養(yǎng)，以相同的細(xì)胞密度種植于不同年齡的新西蘭兔的角膜基質(zhì)上，觀察角膜基質(zhì)載體培養(yǎng)的角膜緣干細(xì)胞的生長情況，原位雜交檢測ABCG2、△Np63的表達(dá)，鑒定LSCs，IPP5.1軟件分析圖像，流式細(xì)胞術(shù)測細(xì)胞周期，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測角膜基質(zhì)載體培養(yǎng)的細(xì)胞中△Np63、ABCG2蛋白的表達(dá)量，運(yùn)用SPSS13.0軟件對析因設(shè)計(jì)資料進(jìn)行方差分析。
　　 結(jié)果：種植于不同年齡角膜基質(zhì)載體上的青

3、年角膜緣干細(xì)胞較其他組增殖快，潛伏期短，形態(tài)較小，以圓形、橢圓形和多邊形為主，形成的集落較大。傳代培養(yǎng)于角膜基質(zhì)載體上的LSCs經(jīng)ABCG2、p63原位雜交檢測，DAB染色大部分細(xì)胞呈陽性反應(yīng)，細(xì)胞胞漿著色呈棕黃色，胞核為藍(lán)色。角膜緣干細(xì)胞供體年齡各水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，相同時(shí)間內(nèi)角膜基質(zhì)載體培養(yǎng)的青年兔角膜緣干細(xì)胞增殖期細(xì)胞所占比例大，△Np63、ABCG2表達(dá)量高；而角膜基質(zhì)供體年齡各水平差異與角膜緣干細(xì)胞和角膜基質(zhì)的交互作用均無統(tǒng)