自體角膜緣干細(xì)胞體外培養(yǎng)后移植的臨床研究.pdf

1、目的：建立人角膜緣干細(xì)胞體外培養(yǎng)模型；探討單眼角膜緣干細(xì)胞缺陷患者自體角膜緣干細(xì)胞體外培養(yǎng)后再移植的臨床療效。 方法：從角膜移植存留的環(huán)狀角膜緣組織上分離含有完整上皮細(xì)胞的2mm×2mm、厚約0.2mm的組織塊數(shù)塊，每個(gè)組織塊剪切成4個(gè)1mm×1mm小組織塊，經(jīng)消化酶處理后置于無上皮細(xì)胞的人羊膜上采用含有20％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，共14天，隔日換液，每日使用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，分別于第7、14天進(jìn)行

2、病理組織學(xué)和抗增殖細(xì)胞核單克隆抗體和廣譜角蛋白抗體免疫組織化學(xué)檢查。自單眼角膜緣干細(xì)胞缺陷患者的健眼上獲取的2mm×2mm角膜緣組織塊在體外以上述方法進(jìn)行培養(yǎng)，待細(xì)胞形成多層時(shí)進(jìn)行患眼自體移植，術(shù)后定期觀察患者視力、角膜新生血管、角膜上皮完整性、角膜透明度。 結(jié)果：角膜緣組織塊體外培養(yǎng)24小時(shí)開始貼壁，48小時(shí)可見細(xì)胞自組織塊邊緣爬行至羊膜上，此后細(xì)胞快速生長，至1周時(shí)，擴(kuò)增的角膜緣上皮細(xì)胞出現(xiàn)匯合并牢固貼附于羊膜之上，2周時(shí)可

3、形成4～5層。所培養(yǎng)細(xì)胞在第7、14天均對廣譜角蛋白抗體和增殖細(xì)胞核抗原單克隆抗體呈陽性反應(yīng)。單眼角膜緣干細(xì)胞缺陷患者自體角膜緣干細(xì)胞體外培養(yǎng)后再移植術(shù)后患者視力均有提高，角膜上皮細(xì)胞修復(fù)良好，角膜新生血管得到抑制，角膜透明度明顯增加。 結(jié)論：以羊膜為底物的消化加組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)的角膜緣上皮細(xì)胞既具有較高的增殖能力、短期內(nèi)可形成多層，又可保持角膜上皮細(xì)胞的特性，所形成的細(xì)胞片可用于角膜緣干細(xì)胞缺陷患者。單眼角膜緣干細(xì)胞缺陷患者自