早產兒視網膜?。≧OP）動物模型的建立及臨床分析.pdf

1、早產兒視網膜病變(retinopathyofprematurity，ROP)是早產兒和低體重兒發(fā)生的一種視網膜血管增生性病變，近年來隨著我國醫(yī)療條件和水平的提高，早產兒的存活率不斷提高，同時ROP的發(fā)生率也相應的增加。目前在世界范圍內早產兒視網膜病變已成為使小兒失明的主要原因，占兒童致盲原因的6％-18％，故引起國內外學者及社會的廣泛關注。ROP的病因是多因素的，其中以低出生體重、低胎齡為最主要因素。目前ROP真正的發(fā)病機制仍未完全明確

2、。因此，研究ROP的危險因素及發(fā)病機制從而達到早期干預，對降低ROP的發(fā)生率和致盲率有著極其重要意義。本研究通過對小鼠氧干預后引發(fā)氧誘導視網膜病變(oxygen-inducedretinopathy，OIR)，模擬人類早產兒視網膜病變，并可通過此模型進一步了解ROP的發(fā)病機制。 第一部分：早產兒視網膜病(ROP)動物模型的建立 目的：通過氧環(huán)境的改變誘導小鼠產生視網膜新生血管(OIR)，模擬人類早產兒視網膜病變，建立早產

3、兒視網膜病(ROP)的動物模型，為研究該病的發(fā)病機制及治療提供實驗基礎。 方法： 1.模型制作：將7日齡C57BL/6J幼鼠放入75％濃度的高氧狀態(tài)下飼養(yǎng)5天，隨后在正常氧環(huán)境下飼養(yǎng)5天，作為ROP模型組：同齡C57BL/6J幼鼠作為正常對照組。 2.視網膜鋪片制作方法的比較：目前視網膜鋪片的制作方法主要有三種：(1)墨汁灌注法(2)高分子量熒光素一右旋糖苷(分子量為2×106)灌注法(3)ADP酶組織化學法。預

4、實驗中均比較了上述方法的優(yōu)缺點。 3.小鼠視網膜新生血管熒光素灌注造影：在出生后12，17天(P12，17)，給已氧誘導視網膜病變模型小鼠的心臟灌注相對高分子量的熒光素，眼球經過組織固定后，通過顯微手術鏡游離視網膜并鋪片，在熒光顯微鏡下觀察視網膜血管的分布與形態(tài)。 4.視網膜新生血管量化：生后12，17天(P12，17)處死小鼠，組織切片方法觀察各組視網膜血管的變化，計數突破內界膜的血管內皮細胞核以量化氧誘導視網膜病變新

5、生血管的程度。 結果： 1.C57BL/6J幼鼠經氧誘導之后，可產生連續(xù)的視網膜新生血管改變，并且有很好的重復性。 2.三種視網膜鋪片制作方法的比較發(fā)現采用較高相對分子質量的熒光素進行視網膜血管造影，方法簡便、快捷，重復性好，血管顯影清晰、安全。 3.在熒光顯微鏡下可以清楚地觀察整個視網膜血管形態(tài)走行；通過調節(jié)焦點視網膜淺層、深層以及二者交通支都清晰顯影。高氧誘導的視網膜新生血管主要發(fā)生在視網膜有血管區(qū)與

6、無血管區(qū)的交界部位，可見滲出、出血、微血管瘤的表現，并可清楚反映隨時間延長發(fā)生的血管改變。 4.組織切片顯示OIR模型在不同時間點突破內界膜(interna1.1imitingmembrane，ILM)的血管內皮細胞數逐漸增多。 結論： 1.暴露在高氧環(huán)境的C57BL/6J幼鼠經過相對低氧后，100％產生視網膜新生血管的改變，形成的ROP模型可以模擬人類早產兒視網膜病變。 2.通過高分子量熒光素灌注造影可

7、以清晰、準確的動態(tài)了解視網膜新生血管模型小鼠眼底血管的病變部位及形態(tài)學改變。可以較好地應用于視網膜新生血管性疾病的基礎研究。 3.視網膜血管熒光素灌注以及組織切片方法均顯示：隨著時間的延續(xù)，ROP模型的視網膜新生血管逐漸增多，病變程度有加重趨勢。 第二部分：早產兒視網膜病篩查及高危因素分析 目的：了解我國早產兒視網膜病變(retinopathyofprematurity，ROP)防治指南出臺后，溫州育英兒童醫(yī)院新

8、生兒監(jiān)護病房(NICU)中ROP的發(fā)病率和全身高危因素。 方法：對2007年1月1日至2007年12月31日在溫州育英兒童醫(yī)院新生兒監(jiān)護病房(NICU)住院的體重≤2000g的早產兒進行ROP篩查，同時對其全身的情況進行分析，分析ROP發(fā)生的高危因素。 結果：在我院NICU住院符合篩查標準并完成ROP篩查的患兒有254例，發(fā)現ROP患兒發(fā)病率為9.4％，出生體重在1600g前后的早產兒ROP發(fā)生率比較有統計學意義(P＜0

9、.05)，發(fā)生Ⅰ期ROP18例，Ⅱ期ROP4例，Ⅲ期及以上ROP1例：激光治療2例，無失明病例。通過logistic多因素逐步回歸分析，發(fā)現ROP的危險因素與孕周、出生體重、吸氧時間、機械通氣、呼吸窘迫綜合癥、輸血密切相關。 結論：ROP防治指南出臺后，溫州育英兒童醫(yī)院NICU中ROP發(fā)生率9.4％。我們推薦ROP篩查標準是≤1600g的早產兒，對于＞1600g的早產兒，我們要根據患兒全身疾病情況有選擇性的進行篩查。低胎齡、低出