SOCS2表達與卵巢癌鉑類耐藥相關(guān)性的研究.pdf

1、卵巢癌是發(fā)病率第二位的女性生殖器惡性腫瘤,但死亡率居婦科惡性腫瘤之首。卵巢癌的高發(fā)年齡段在40~70歲之間。發(fā)病率占婦科惡性腫瘤的22.9％,僅次于宮頸癌,并以每年1％的速度遞增。由于缺乏特異的臨床癥狀和相應(yīng)的早期診斷手段,患者僅在出現(xiàn)腹部疼痛,消化道癥狀時才就診,初診時2/3已屬晚期。手術(shù)常難徹底根除腫瘤,故以紫杉醇聯(lián)合鉑類化療在卵巢癌綜合治療中占有重要地位,但是腫瘤細胞的原發(fā)性或繼發(fā)性耐藥是影響化療效果,造成腫瘤復(fù)發(fā)的主要原因。使患

2、者術(shù)后的五年生存率僅為20％~30％。若想提高卵巢癌患者的治愈率,明確耐藥相關(guān)分子機制,尋找有效的耐藥逆轉(zhuǎn)劑和治療靶標是當務(wù)之急,這對提高卵巢癌化療敏感性,逆轉(zhuǎn)耐藥,調(diào)整治療方案具有重要的意義。近年來發(fā)現(xiàn)一類依賴細胞因子的負性調(diào)控蛋白,細胞因子信號轉(zhuǎn)導抑制因子SOCS家族。該家族主要通過對JAK/STAT信號通路的負反饋調(diào)節(jié)發(fā)揮生物學功能。JAK/STAT途徑參與多種細胞因子,生長因子和激素的轉(zhuǎn)導達到調(diào)節(jié)細胞的生長,增殖,分化和凋亡的目

3、的。近年來發(fā)現(xiàn)JAK/STAT信號通路參與多種腫瘤的發(fā)生,發(fā)展。SOCS家族則是通過負反饋調(diào)節(jié)該通路而抑制細胞異常增殖,促進細胞凋亡。該實驗通檢測卵巢癌順鉑敏感株A2780細胞、順鉑耐藥株CP70細胞中SOCS2的表達,探討SOCS2與卵巢癌鉑類耐藥的關(guān)系。應(yīng)用甲基化酶抑制后兩種卵巢癌細胞中SOCS2的變化及對化療藥物的敏感性。探討SOCS2在卵巢癌細胞耐藥中可能起到的作用,觀測SOCS2蛋白表達升高后CP70細胞對順鉑化療敏感性的改變

4、。為逆轉(zhuǎn)卵巢癌鉑類耐藥提供具有臨床應(yīng)用價值的依據(jù)。
　　研究目的：
　　1.探討SOCS2基因表達與卵巢癌鉑類耐藥的相關(guān)性及其在卵巢癌鉑類耐藥中的可能機制。
　　2.探討A2780和CP70細胞SOCS2基因的甲基化狀態(tài)。探究應(yīng)用甲基化酶抑制劑后SOCS2的表達變化及其對順鉑耐藥性影響。
　　3.pEGFP-N1-SOCS2瞬時轉(zhuǎn)染增加SOCS2蛋白表達后卵巢癌細胞對順鉑耐藥性的改變及其可能作用機制。
　　

5、研究內(nèi)容和方法：
　　1.RT-PCR、western bloting、免疫細胞化學檢測卵巢癌順鉑敏感株A2780細胞、順鉑耐藥株CP70細胞中SOCS2的mRNA和蛋白表達及定位;western bloting、免疫細胞化學檢測順鉑處理后A2780和CP70細胞中SOCS2蛋白表達及定位的變化,分析SOCS2表達與卵巢癌鉑類耐藥的相關(guān)性。
　　2.甲基化實時定量PCR檢測A2780和CP70細胞SOCS2基因的甲基化狀態(tài)。

6、RT-PCR, western bloting、免疫細胞化學法檢測甲基化酶抑制劑5-Aza-CdR處理A2780與CP70細胞后SOCS2的mRNA和蛋白表達。MTT法檢測藥物處理后兩種細胞對順鉑敏感性的改變。
　　3.MTT法檢測pEGFP-N1-SOCS2瞬時轉(zhuǎn)染CP70細胞增加SOCS2蛋白表達后CP70細胞對順鉑敏感性的改變;TUNEL法檢測增加SOCS2蛋白表達后,順鉑誘導CP70細胞凋亡改變的狀況。
　　研究結(jié)果

7、：
　　1.A2780細胞的SOCS2基因和蛋白表達水平較CP70細胞高,在A2780細胞與CP70細胞中均呈漿表達。順鉑處理A2780和CP70細胞后,兩種細胞中SOCS2蛋白表達均呈時間和劑量依賴性降低。
　　2.A2780和CP70細胞SOCS2基因都有不同程度的甲基化改變。應(yīng)用不同劑量的甲基化酶抑制劑處理兩種細胞后,A2780與CP70細胞中SOCS2的蛋白表達呈現(xiàn)劑量依賴性增高,并呈現(xiàn)核漿共表達狀態(tài)。對順鉑的敏感性

8、均增強。
　　3.感染pEGFP-N1-SOCS2后,CP70細胞對順鉑的敏感性有待進一步探討。
　　結(jié)論：
　　1.SOCS2在順鉑敏感細胞和耐藥細胞中表達強度不同,順鉑誘導后兩種卵巢癌細胞SOCS2蛋白表達呈時間和劑量依賴性減弱,提示SOCS2在卵巢癌順鉑耐藥機制形成中發(fā)揮重要作用。
　　2.A2780和CP70細胞SOCS2的低表達可能與其啟動子CpG島的甲基化狀態(tài)有關(guān),去甲基化后,SOCS2蛋白表達明顯升