高爾基體糖蛋白73對原發(fā)性肝癌的診斷價值研究.pdf

1、背景：
　　原發(fā)性肝癌（以下簡稱:肝癌）是世界上常見的10種惡性腫瘤之一，死亡率位居全球第二。我國是肝癌的高發(fā)地區(qū)，約55％新發(fā)病例和死亡病例發(fā)生在中國，而且仍然呈上升趨勢。肝癌起病隱匿，臨床上約有2/3的肝癌患者初診時已屬中晚期，失去了手術切除病灶的機會，預后差。提高肝癌的整體治療水平重在早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療。甲胎蛋白(α-fetoprotein，AFP)是診斷肝癌的重要指標，但仍有一定局限性:臨床上有近1/3的肝癌患者AFP

2、呈陰性或低濃度陽性，而且急性病毒性肝炎、慢性活動性肝炎、肝硬化活動期以及睪丸癌或卵巢癌等非肝癌疾病通常也出現(xiàn)AFP升高，可見AFP作為肝癌早期診斷的標記物尚不夠理想。因此，尋找新的更加敏感和特異的肝癌血清標記物一直是肝癌研究的熱點和重點。高爾基體糖蛋白73(golgiprotein-73，GP73)是新近發(fā)現(xiàn)的與肝癌關系密切的糖蛋白，現(xiàn)有的一些研究報道顯示GP73是一個有重大潛在價值的肝癌標志物，敏感度和特異度均超過AFP，有望成為新的

3、更好的早期診斷肝癌或預警的肝癌標志物。由于廣西是我國原發(fā)性肝癌最高發(fā)的幾個省市地區(qū)之一，肝癌已成為廣西的常見病和多發(fā)病，而且廣西肝癌年死亡率高達34.39/10萬，占全部惡性腫瘤死亡率的30.70％，高居廣西腫瘤死因譜首位。因此，在廣西開展GP73對肝癌診斷價值的研究非常具有區(qū)域代表性和獨特性，為GP73早日成為臨床應用的肝癌診斷標志物提供重要的參考依據(jù)?；谝陨涎芯克悸?，本課題以廣西地區(qū)肝癌患者為研究對象，探索GP73在肝癌診斷中的價

4、值。
　　方法：
　　一、肝癌組織中GP73的表達
　　1.采用免疫組織化學染色法檢測92例肝癌組織、癌旁組織及29例正常肝組織中GP73及AFP表達強度;分析GP73表達程度與肝癌臨床病理特征的關系。
　　2.采用蛋白免疫印跡(Western Blotting)法檢測92例肝癌組織、癌旁組織及29例正常肝組織中GP73表達，將檢測結果與免疫組化結果進行相關分析。
　　二、肝癌患者血清GP73的表達水平

5、r>　　收集外周血血清共1201例，包括肝癌403例，肝硬化162例，乙型病毒性肝炎200例，乙肝病毒攜帶者107例，肝良性占位39例，其他惡性腫瘤140例和健康對照150例。應用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫定量測定(ELISA)方法檢測血清中GP73水平，電化學發(fā)光法檢測血清中AFP水平。
　　三、肝癌術后患者及肝癌高危人群血清GP73水平動態(tài)監(jiān)測
　　1.對79例肝癌患者手術前后進行動態(tài)觀察，采集患者術前及術后多次復查的血清標本，

6、采用ELISA方法檢測血清GP73水平，電化學發(fā)光法檢測血清中AFP水平，監(jiān)測GP73和AFP變化情況。
　　2.對132例肝癌高危人群進行定期隨訪，復查時采集受試者血清標本，采用ELISA方法檢測血清中GP73水平。
　　結果：
　　一、肝癌組織中GP73的表達
　　1.免疫組化檢測結果:
　?、貵P73在肝癌組織、癌旁組織中表達增高，陽性率分別為97.8％及92.3％，顯著高于AFP（97.8％ vs.

7、71.7％，92.3％ vs.54.3％，P＜0.05）。正常肝臟組織中GP73及AFP染色均為陰性。
　?、贕P73表達強度與肝癌病理分級、Child-Pugh分級呈正相關，P＜0.05。
　?、跥P73在肝癌組織中表達與年齡、性別、血清AFP濃度、腫瘤大小、肝硬化、HBV感染、淋巴結轉移情況、門脈癌栓及臨床分期各因素無明顯相關性。
　　2.Western Blotting方法檢測結果:
　?、貵P73在肝癌組

8、織中灰度值為12.90±27.81;癌旁組織為6.28±23.22;正常肝組織為1.58±7.58。肝癌組織中GP73表達量顯著高于癌旁組織和正常肝組織，而癌旁組織中GP73水平較正常肝組織亦明顯升高（P均＜0.05)。
　?、诟鹘M灰度值與免疫組化檢測GP73表達強度成正相關，GP73表達越強，灰度值越高。
　　二、肝癌患者血清GP73的表達水平
　　1.肝癌組血清GP73水平顯著高于肝硬化組、乙型肝炎組、乙肝攜帶者組

9、、肝良性占位組、其他惡性腫瘤組及健康志愿者組（324.38±56560.00 vs.93.12±4072.77，23.48±146.82，16.63±137.73，6.84±37.57，7.22±88.49，12.68±79.36，P＜0.05）。
　　2.通過受試者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲線設定65.25ng/mL為臨界值，GP73診斷肝細胞癌的敏感度和特異度分別為

10、82.3％和82.7％，顯著高于AFP（72.2％和79.4％），P＜0.05; GP73和AFP曲線下面積為0.865和0.792(P＜0.05)。
　　3.肝癌組AFP≤39.32 ng/mL共112例，其中84.0％(94/112)患者的GP73＞65.32 ng/mL。
　　4.聯(lián)合檢測GP73和AFP診斷肝癌的敏感度提高到94.4％，特異度為73.2％，陰性預測值達到0.970，Youden指數(shù)提高到0.676。<

11、br>　　5.肝癌組中小肝癌共75例，其中GP73＞65.25 ng/mL有49例，AFP＞39.32ng/mL為35例，GP73對小肝癌檢出率高于AFP，P＜0.05。
　　6.相關性分析結果表明，各組待檢者血清GP73與AFP表達水平之間均無相關性。
　　三、肝癌術后患者及肝癌高危人群血清GP73水平動態(tài)監(jiān)測
　　1.對79例手術患者術后進行定期追蹤隨訪8個月，中位隨訪時間8個月，終末隨訪率為84.8％。手術前GP

12、73陽性的肝癌組患者血清GP73在術后第1～8周下降明顯，之后都維持在一個較低水平。手術前GP73陰性的肝癌患者手術后血清GP73無顯著降低，其中5例患者檢測到術后第1周時GP73較術前升高，但隨后在第2～8周內(nèi)明顯下降至正常水平。
　　2.隨訪過程中發(fā)現(xiàn)3例復發(fā)/轉移患者，其血清GP73水平都較前升高，但對復發(fā)/轉移前后GP73檢測結果差異無統(tǒng)計學意義，P=0.111。其中1例為AFP陰性病例，從初次就診檢查至術后第28周復發(fā)，

13、多次檢測患者血清AFP均為陰性。但患者血清GP73在術前已經(jīng)顯著升高（317.89 ng/mL），術后一直維持在較高水平，在第24周復查時GP73已經(jīng)較前一次復查有所升高（第16周為47.3 ng/mL，第24周為57.29 ng/mL），至第28周確認復發(fā)時血清GP73進一步升高(139.66 ng/mL)。
　　3.對132例肝癌高危人群患者進行追蹤隨訪6個月，中位隨訪時間6個月，終末隨訪率為72.0％，進行復查1次，未發(fā)現(xiàn)新

14、發(fā)肝癌病例。復查前后血清GP73水平為20.13±323.86和23.17±297.30，P=0.000，差異有統(tǒng)計學意義。
　　結論：
　　1.GP73在肝癌和癌旁組織中表達升高，在肝癌組織表達陽性率高于AFP。GP73表達強度與Child-Pugh分級及肝癌的病理分級呈正相關。
　　2.GP73可作為一種新的、較好的診斷肝癌的血清標志物，其敏感度和特異度優(yōu)于AFP，可提高血清AFP陰性的肝癌患者的診斷率;GP73對