GM1對大鼠脊髓半切損傷后神經(jīng)功能修復作用的研究.pdf

1、目的：通過建立大鼠脊髓半橫斷損傷模型，應用神經(jīng)營養(yǎng)藥物GM1對損傷大鼠進行腹腔注射，分析并評價其在脊髓損傷后神經(jīng)功能恢復過程中的作用，探尋脊髓損傷后GM1給藥的最佳時間窗，并討論GM1對于損傷脊髓損傷修復作用的可能機制。 方法： 1、在顯微鏡下，利用自制的顯微刀片右側半橫斷切割損傷大鼠T10脊髓，建立脊髓半橫斷損傷模型。 2、12周齡雄性Wistar大鼠126只，隨機分為3組，即假手術組(只行椎板開窗，不行脊髓損

2、傷)、對照組(生理鹽水腹腔給藥)、治療組(GM1腹腔給藥)，除假手術組外均行脊髓半橫斷損傷，n=42。 3、所有動物均選擇7個時間點，即：術前1天、術后立即、術后1天、術后3天、術后7天、術后14天、術后28天，術后按照體重比一次給藥，觀察并記錄大鼠的一般情況及BBB評分，持續(xù)至傷后12周。 4、各組大鼠各時間點隨機抽取3只，均于給藥后2周，立體定向儀下，利用微量注射器行大腦感覺運動區(qū)BDA順行示蹤劑注射，并于注射BDA

3、2周后取脊髓病理標本，快速冰凍后在熒光顯微鏡下觀察損傷脊髓附近的神經(jīng)軸突走行。 5、除注射BDA大鼠外其余各組大鼠均進行4％多聚甲醛液心臟灌注，取損傷部位脊髓，進行HE、GFAP等染色。觀察傷后脊髓形態(tài)、軸突再生、脊髓空洞、膠質瘢痕增生等改變。 6、應用顯微圖像分析軟件Image pro plus對BDA切片、GFAP切片，進行分析處理。采用t檢驗(student's t-test)比較兩組數(shù)據(jù)之間的差異性，用方差分析(

4、analysis of variance，ANOVA)比較多組數(shù)據(jù)間的差異性，p<0.05即認為差異具有統(tǒng)計學意義，p<0.01即認為差異具有顯著統(tǒng)計學意義。 結果： 1、大鼠脊髓半橫斷模型成功穩(wěn)定，且傷口整齊，重復性好，損傷程度恒定，解剖定位準確，功能障礙亦確定，便于進行SCI的基礎理論研究和神經(jīng)生物學的研究。 2、術前所有動物BBB評分均為21分，手術動物損傷后1天內均呈右下肢癱瘓，隨后開始逐漸恢復，隨著時間

5、的推移各組動物評分均逐漸增加，但各組之間恢復的程度不同。傷后3d-2w這一階段BBB評分增加速度最快，2w-5w這一階段增速仍較快，傷后5w-8wBBB評分增幅逐漸緩慢，8w以后BBB評分不再明顯改變。與對照組對比分析BBB評分變化可以看出：脊髓損傷后0-14天GM1給藥，能夠促進大鼠BBB評分增加，兩者數(shù)據(jù)差別具有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；脊髓損傷超過14天GM1給藥，對大鼠BBB評分改變影響不大，兩者數(shù)據(jù)差別沒有統(tǒng)計學意義(p>0

6、.05)。假手術組動物各時間點BBB評分都為21分。 3、BDA皮質脊髓束神經(jīng)纖維順行示蹤結果顯示，假手術組脊髓軸突顯色清晰、著色均勻，各時間點沒有變化，能夠順利通過T10段脊髓下行。對照組和治療組損傷脊髓處可以看到較為明顯的脊髓半橫斷痕跡，在損傷處有熒光顯色劑濃集，對照組神經(jīng)纖維極少突破損傷脊髓下行，術后≤2周內GM1給藥動物神經(jīng)纖維可以通過損傷脊髓下行，術后>2周GM1給藥組動物軸突下行不明顯。傷后>2周動物治療組和對照組著

7、色都不明顯，差別沒有統(tǒng)計學意義。 4、GFAP在假手術組表達很少，各個時間點沒有變化。脊髓損傷動物術后1～14天GFAP表達持續(xù)增加，對照組和GM1治療組差別不明顯。術后≤2周GM1給藥組動物，在脊髓損傷2周以后GFAP表達開始減少，而對照組變化不明顯，兩者差別具有統(tǒng)計學意義。術后>2周GM1給藥組和對照組GFAP表達差別不大，但都呈增高表現(xiàn)。 結論： 1、顯微鏡下制作的Wistar大鼠T10段脊髓半橫斷模型，損

8、傷程度恒定，解剖定位準確，功能障礙確定，重復性好。 2、術后14天內GM1給藥有助于脊髓損傷大鼠BBB運動功能評分增加，尤以術后7天內給藥效果更好。術后>2周GM1給藥對動物運動功能恢復效果不明顯。 3、脊髓損傷早期應用GM1有助于再生軸突穿過損傷脊髓下行，應用BDA順行示蹤技術觀察到神經(jīng)軸突在脊髓內的走行，傷后>2周應用GM1效果不明顯。 4、GM1腹腔給藥能夠減輕損傷大鼠脊髓半橫斷處GFAP的形成，緩解膠質瘢