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1、江蘇大學碩士學位論文Fis對傷寒沙門菌基因表達的系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用姓名：李安平申請學位級別：碩士專業(yè)：臨床檢驗診斷學指導教師：黃新祥20100608江蘇大學碩士學位論文至大腸埃希菌TGl中篩選陽性質(zhì)粒，經(jīng)序列分析鑒定后將陽性重組載體及空載體分別轉(zhuǎn)入加基因缺陷變異株，作為加基因缺陷回補株和對照株。(5)實時熒光定量PCR(qRTPCR)分析：選擇部分表達差異基因，設計并合成特異性引物，進行實時熒光定量PCR，驗證DNA芯片分析結(jié)果；(6)動力實
2、驗分析：用半固體平板培養(yǎng)觀察野生株、加缺陷變異株和回補株的動力；(7)加基因的克隆與表達：根據(jù)加基因兩端序列設計引物，以傷寒沙門菌基因組為模板，通過PCR擴增獲得不含啟動子及終止子區(qū)域的加基因編碼區(qū)DNA片段，構(gòu)建表達載體pBAD／Fis，轉(zhuǎn)入大腸埃希菌Topl0中，用L邛_ⅡJ拉伯糖誘導加基因的表達，Ni柱純化Fis蛋白。結(jié)果：(1)PCR及序列分析證實，加基因缺陷變異株中基因159bp被6bp取代，表明成功構(gòu)建加基因缺陷變異株；(2
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