基因芯片分析EB病毒LMP1誘導(dǎo)鼻咽癌干細(xì)胞增殖的機(jī)制.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:鼻咽癌(NPC)的發(fā)病與EB病毒感染密切相關(guān),EB病毒編碼的潛伏性膜蛋白1(LMP1)是其重要致瘤蛋白。本研究旨在探討LMP1羧基末端CTAR2的TRADD活性區(qū)在鼻咽癌干細(xì)胞SP18增殖中的作用及機(jī)制,為揭示EBV的致瘤機(jī)理提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
  方法:培養(yǎng)產(chǎn)RV-LMP1和RV-LMP1TRADD逆病毒的PA317細(xì)胞,收集細(xì)胞上清,分別感染鼻咽癌干細(xì)胞SP18,經(jīng)G418篩選后融合克隆,免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)LMP1和 LM

2、P1TRADD蛋白的表達(dá),建立表達(dá) LMP1及 CTAR2突變 LMP1(LMP1TRADD)的SP18細(xì)胞系,即SP18-LMP1細(xì)胞和SP18-LMP1TRADD細(xì)胞。然后繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、平皿克隆實(shí)驗(yàn)、軟瓊脂集落實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)觀察LMP1TRADD對(duì) SP18增殖的影響。然后,采用基因芯片檢測(cè) SP18-LMP1細(xì)胞和SP18-LMP1TRADD細(xì)胞間的差異表達(dá)基因,并選用RT-PCR驗(yàn)證部分基因的表達(dá)。
  結(jié)果:

3、>  1、免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示,建立的SP18-LMP1細(xì)胞和SP18-LMP1TRADD細(xì)胞均在細(xì)胞膜和漿中表達(dá)LMP1蛋白。
  2、繪制的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線結(jié)果顯示,SP18-LMP1細(xì)胞生長(zhǎng)速度較SP18-LMP1TRADD細(xì)胞快。
  3、軟瓊脂集落和平皿克隆結(jié)果顯示,SP18-LMP1細(xì)胞較SP18-LMP1TRADD細(xì)胞形成的集落數(shù)多,體積大。
  4、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,SP18-LMP1細(xì)胞S期和G

4、2期細(xì)胞比例較SP18-LMP1TRADD細(xì)胞多,細(xì)胞增殖指數(shù)高。
  5、經(jīng)基因芯片共檢測(cè)出428個(gè)差異表達(dá)基因,其中與細(xì)胞增殖相關(guān)基因76個(gè)(上調(diào)基因38個(gè),下調(diào)基因38個(gè))。
  6、RT-PCR驗(yàn)證部分基因的表達(dá)情況與基因芯片檢測(cè)結(jié)果基本一致。
  結(jié)論:
  1、TRADD活性區(qū)是LMP1影響SP18細(xì)胞增殖的重要功能活性位點(diǎn)。
  2、TRADD活性區(qū)通過(guò)提高S期和G2期細(xì)胞比例,增加細(xì)胞的增殖

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