MiR-1285對(duì)胰腺癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響及作用機(jī)制.pdf

1、胰腺癌早期診斷困難、惡性程度高，是預(yù)后最差的惡性腫瘤之一，5年生存率低于7％。MiRNAs因可同時(shí)參與腫瘤的增殖、凋亡、耐藥及侵襲等多個(gè)功能通路的調(diào)控而受到廣泛關(guān)注。miR-1285屬于miR-612/1285/3187-5p簇中的一員，目前只有在肝癌和腎細(xì)胞腎癌中有所報(bào)道，但其在胰腺癌中的調(diào)控機(jī)制仍不明確，因此我們將miR-1285作為本研究的研究對(duì)象，深入研究其對(duì)胰腺癌增殖、周期、化療敏感性、侵襲、遷移、凋亡等惡性生物學(xué)行為的影響，

2、并尋找其靶基因，探索其調(diào)控機(jī)制。
　　YAP1蛋白是Hippo信號(hào)通路的主要效應(yīng)因子之一，近兩年來大量研究證實(shí)其在多種惡性腫瘤中均發(fā)揮促癌作用。
　　目的:
　　1.明確miR-1285對(duì)胰腺癌細(xì)胞株增殖、周期、化療敏感性、侵襲、遷移、凋亡等表型的調(diào)控作用;
　　2.明確miR-1285的靶基因;
　　3.初步探索miR-1285及靶基因的下游信號(hào)通路。
　　方法:
　　本研究首先通過實(shí)時(shí)定量P

3、CR（探針法）檢測(cè)檢測(cè)miR-1285在各細(xì)胞系中的表達(dá)量，并選取細(xì)胞株作為研究對(duì)象。隨后，通過脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染法改變細(xì)胞內(nèi)源性miR-1285的表達(dá)后，采用CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-1285對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖能力和化療敏感性的影響，采用PI單標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期，采用transwell法檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲能力，采用AnnexinⅤ/PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡，驗(yàn)證miR-1285對(duì)胰腺癌細(xì)胞系惡性生物學(xué)行為的影響。隨后

4、，通過生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫預(yù)測(cè)miR-1285的靶基因，將多個(gè)數(shù)據(jù)庫預(yù)測(cè)到的結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，并實(shí)時(shí)定量PCR（染料法）和western blot法分別檢測(cè)靶基因mRNA和蛋白的表達(dá)，同時(shí)進(jìn)一步驗(yàn)證miR-1285-YAP1的下游效應(yīng)蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.MiR-1285在胰腺癌耐藥株中較親本株低表達(dá);
　　2.體外試驗(yàn)中，miR-1285可顯著抑制胰腺癌細(xì)胞增殖，抑制胰腺癌細(xì)胞G1→S期轉(zhuǎn)化，增加吉西他濱化療

5、敏感性，抑制細(xì)胞遷移和侵襲能力，促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞凋亡;
　　3.MiR-1285的靶基因?yàn)閅AP1，可能通過抑制YAP1 mRNA翻譯的途徑抑制YAP1蛋白表達(dá);
　　4.MiR-1285-YAP1下游通路蛋白包括，EGFR、β-catenin、Bim、PTEN等。結(jié)論:
　　1.MiR-1285通過下調(diào)YAP1蛋白表達(dá)，在胰腺癌細(xì)胞株中發(fā)揮抑癌作用;
　　2.EGFR、β-catenin、Bim、PTEN等蛋白參