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文檔簡介
1、淀粉是許多糧食作物的種子、馬鈴薯塊莖及多種植物塊根的主要組成成份,在人類生活中起著舉足輕重的作用。開展淀粉合成相關基因的研究是闡明淀粉合成機理以及利用基因工程改良淀粉品質(zhì)的基礎,具有重要的理論和應用價值。本文根據(jù)發(fā)表在GeneBank中的基因序列,設計特異性引物,利用RT-PCR方法,從粳稻品種日本晴未成熟種子的cDNA中克隆到完整的水稻淀粉粒結合型淀粉合成酶(WAXY)蛋白質(zhì)編碼區(qū)cDNA及完整的水稻淀粉分支酶3(3, RBE3)蛋白
2、質(zhì)編碼區(qū)cDNA;利用PCR方法從粳稻品種日本晴基因組DNA中克隆到水稻W(wǎng)axy,基因和水稻RBE3基因的片段各一個。 ⑴克隆的水稻W(wǎng)axy基因蛋白質(zhì)編碼區(qū)(CDS)cDNA全長1830bp,編碼610個氨基酸。編碼序列與已發(fā)表的水稻淀粉粒結合型淀粉合成酶I蛋白質(zhì)編碼區(qū)cDNA序列相比,核酸序列有兩個核酸的突變,推導的氨基酸序列也有兩個氨基酸的突變,但沒有影響到蛋白質(zhì)的正常活性。從水稻基因組DNA中克隆到的水稻W(wǎng)axy基因片段長
3、206bp,與已發(fā)表序列完全一致。 ⑵克隆的水稻RBE3基因蛋白質(zhì)編碼區(qū)(CDS)cDNA全長2478bp,編碼826個氨基酸。編碼序列與已發(fā)表的水稻RBE3基因蛋白質(zhì)編碼區(qū)cDNA序列相比,核酸序列有兩個核酸的突變,推導的氨基酸序列也有一個氨基酸的突變,但沒有影響到蛋白質(zhì)的正?;钚?。從水稻基因組DNA中克隆到的水稻RBE3基因片段長195bp,與已發(fā)表序列完全一致。 ⑶利用獲得的完整水稻W(wǎng)axy基因蛋白質(zhì)編碼區(qū)cDNA
4、及完整的水稻RBE3基因蛋白質(zhì)編碼區(qū)cDNA,以克隆的谷蛋白A3基因(GluA3)啟動子控制基因的表達,構建了這兩個基因的過量植物表達載體;再根據(jù)siRNA選取原則,選擇了水稻W(wǎng)axy基因及水稻RBE3基因片段,分別以GluA3啟動子和高分子量麥谷蛋白基因(HMW)啟動子調(diào)控這兩個基因的轉錄,構建了這兩個基因的siRNA植物表達載體;構建了基因過量表達和RNAi結合的多基因表達載體。 ⑷用農(nóng)桿菌介導的方法對水稻品種中花11進行轉
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