魷魚內(nèi)臟糖蛋白提取分離及其免疫調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、糖蛋白是指由寡糖與多肽鏈共價(jià)連接而成的一類結(jié)合蛋白質(zhì)。研究表明，糖蛋白具有調(diào)節(jié)免疫、抑制腫瘤、降低血糖、血脂、抗氧化、防衰老等作用，在新型特種藥物及功能性食品開發(fā)方面具有廣闊的應(yīng)用前景。 本文檢測了魷魚內(nèi)臟的營養(yǎng)成分，優(yōu)化了魷魚內(nèi)臟中糖蛋白的提取工藝，對(duì)魷魚內(nèi)臟糖蛋白進(jìn)行了分離、純化，并對(duì)其免疫調(diào)節(jié)活性進(jìn)行研究，為綜合利用魷魚內(nèi)臟資源提供理論依據(jù)。 通過對(duì)魷魚內(nèi)臟營養(yǎng)成分檢測結(jié)果顯示：魷魚內(nèi)臟中主要營養(yǎng)成分是蛋白質(zhì)和脂肪

2、，分別為57.62％和14.76％，總糖含量較高，為8.76％；氨基酸總量為46.4％，必需氨基酸和氨基酸總量的比值以及必需氨基酸和非必需氨基酸比值分別為37.3％和0.59。在所測的氨基酸中，谷氨酸含量最高，為6.47％，必需氨基酸中亮氨酸含量最高，為3.62％；脂肪酸中EPA和DHA含量較高，分別為14.29％和20.23％；礦物質(zhì)元素中Ca、Mg、P含量充足，Zn、Fe、Cu等微量元素含有較高，分別為40.5μg/g、10.3μg

3、/g、1.1μg/g。 以糖蛋白得率為指標(biāo)，分別研究了料液比、溫度、提取時(shí)間及提取液鹽濃度對(duì)魷魚內(nèi)臟糖蛋白提取得率的影響，并根據(jù)L9(34)正交表綜合分析確定最佳提取工藝條件為：料液比為1:6、浸提時(shí)間為55min、浸提液鹽濃度為3％、浸提溫度為80℃。 采用硫酸銨分級(jí)沉淀和SephadexG-100凝膠柱層析相結(jié)合，對(duì)魷魚內(nèi)臟糖蛋白進(jìn)行了分離純化。用硫酸銨的飽和度分別為20-40％，40-60％，60-80％分三級(jí)沉淀

4、糖蛋白，得到GSV-1、GSV-2和GSV-3，再對(duì)其進(jìn)行SephadexG-100凝膠過濾，使分級(jí)蛋白中的蛋白質(zhì)按其分子量的大小先后洗脫，分別收集到魷魚內(nèi)臟糖蛋白GSV1-1、GSV2-1和GSV3-1。并檢測了上述樣品的部分理化指標(biāo)。通過SDS-聚丙烯酰胺電泳分析結(jié)果表明，魷魚內(nèi)臟糖蛋白的分子量范圍在36KD-130KD之間；對(duì)純化后樣品進(jìn)行紅外光譜分析說明，這些樣品具有典型的糖蛋白的特征吸收峰。 本文研究了魷魚內(nèi)臟糖蛋白對(duì)

5、KM小鼠的非特異性免疫、細(xì)胞免疫和體液免疫三方面影響，確定其免疫調(diào)節(jié)作用。具體實(shí)驗(yàn)方法是：小鼠炭廓清實(shí)驗(yàn)和免疫器官重量的測定；MTT法檢測NK活性和小鼠脾細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)；血清溶血素水平和抗體生成細(xì)胞數(shù)的測定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： (1)魷魚內(nèi)臟糖蛋白粗品(GSV-0)三個(gè)劑量均對(duì)免疫抑制小鼠和正常小鼠的廓清指數(shù)有顯著的增強(qiáng)作用；GSV-0在10mg/kg劑量對(duì)免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù)有顯著的提高作用，GSV-0在30mg/kg、100mg

6、/kg劑量對(duì)正常小鼠的胸腺指數(shù)有非常顯著和顯著提高作用。 (2)GSV-0、GSV-1和GSV1-1只在較高劑量時(shí)顯著促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞增殖，而GSV-2、GSV-3、GSV1-1、GSV2-1和GSV3-1在低劑量時(shí)就能顯著促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞增殖；GSV不能增強(qiáng)有絲分裂原ConA誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖反應(yīng)；GSV對(duì)NK細(xì)胞活性的影響隨著的純度的提高而明顯增強(qiáng)，且樣品GSV1-1、GSV2-1和GSV3-1在各個(gè)劑量上，均對(duì)NK細(xì)胞都有明顯的