VEGF基因定向轉染誘導缺血心肌血管生成及防止血管橋狹窄的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該研究的目的旨在構建含有編碼165個氨基酸的人VEGFcDNA的表達載體(phVEGF<,165>),并將其直接轉染到血管內皮細胞和心肌組織,觀察轉染phVEGF<,165>對體外培養(yǎng)的血管內皮細胞的增殖作用以及對兔心肌組織血管形成的影響.研究的主要內容包括三個部分.第一部分含人VEGF<,165>cDNA表達載體phVEGF<,165>的構建目的:構建含人VEGF<,165>cDNA表達載體phVEGF<,165>,建立VEGF基因治

2、療的基礎.方法:通過酶切,DNA片斷回收的方法分別獲得編碼165個氨基酸的hVEGFcDNA和真核表達載體PCR3片斷,在適當的條件下用T4DNA連接酶把hVEGFcDNA和PCR3片斷連接起來,連接產物轉化DH5 α感受態(tài)細胞并在LB平板上置37℃培養(yǎng).第二部分VEGF基因定向轉染防止血管橋狹窄的實驗研究目的:將phVEGF<,165>直接轉染到兔頸總動脈腔,觀察VEGF基因對血管吻合口血栓形成和內膜、平滑肌增生的影響.方法:切斷兔頸

3、總動脈,進行原位端端吻合,向吻合口血管腔內注入真核表達質粒phVEGF<,165>(治療組)和真核載體pcDNA<,3>溶液(對照組),使之在腔內滯留30min,應用RT-PCR和蛋白印記法檢測吻合口組織的VEGF基因的表達,并進行粘附于吻合口同位素標記的血小板計數、吻合口同位素摻入量和病理形態(tài)學檢測.第三部分VEGF基因定向轉染誘導缺血心肌血管生成的實驗研究目的:觀察人血管內皮生長因子(hVEGF)質粒直接心肌注射對兔急性心肌缺血后側

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