同源結(jié)構(gòu)域相互作用蛋白激酶HIPK2在宮頸癌中的表達(dá)及其功能研究.pdf

1、目的：宮頸癌是女性常見惡性腫瘤之一，目前其死亡率仍居世界首位。人乳頭狀瘤病毒(Human Papilloma Virus，HPV)感染是宮頸癌的主要致病原因，但細(xì)胞內(nèi)遺傳因素的改變在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展也起著重要的作用，因此需要進一步研究和尋找有臨床意義的與宮頸癌相關(guān)的基因。同源結(jié)構(gòu)域相互作用的蛋白激酶2(HIPK2)具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞生長，而且與胚胎發(fā)生，腫瘤發(fā)生發(fā)展等密切相關(guān)，但與宮頸癌的關(guān)系仍未知。
　　方法：通過實時定

2、量熒光real time RT-PCR和Western blot方法檢測HIPK2mRNA和蛋白在正常宮頸、宮頸癌組織和細(xì)胞株HeLa中的表達(dá)。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)進行在宮頸癌組織中HPV高危亞型(16和18)的檢測。應(yīng)用RNA干擾技術(shù)干擾宮頸癌細(xì)胞HeLa中HIPK2的表達(dá)，并采用real-timeRT-PCR和Western blot法檢測干擾效率。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測干擾前后細(xì)胞凋亡的變化，并用Western bl

3、ot法檢測凋亡相關(guān)蛋白caspase-3的表達(dá)。MTT實驗、劃痕實驗和Transwell侵襲試驗分別檢測細(xì)胞生長、細(xì)胞運動和侵襲力的改變，并用Western blot法檢測侵襲相關(guān)蛋白MMP2、MMP9的表達(dá)。
　　結(jié)果：HIPK2 mRNA在宮頸癌組織中的表達(dá)水平明顯高于正常宮頸組織(P<0.05)。HIPK2 mRNA在宮頸癌細(xì)胞中表達(dá)呈強陽性。HIPK2蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)水平顯著高于正常宮頸組織(P<0.05)，與re

4、al-time RT-PCR結(jié)果一致。宮頸癌組織中HPV16和HPV18陽性率為70％(14/20)。HIPK2在宮頸癌組織中的表達(dá)與HPV16和HPV18存在顯著相關(guān)性(r=0.655，P<0.05)。成功設(shè)計、合成和構(gòu)建了含有HIPK2特異性siRNA的重組病毒質(zhì)粒。宮頸癌細(xì)胞HeLa轉(zhuǎn)染HIPK2 siRNA后，HIPK2 mRNA及蛋白在宮頸癌細(xì)胞HeLa中的表達(dá)特異并有效地被抑制。RNA干擾HIPK2抑制了細(xì)胞凋亡，各組細(xì)胞凋

5、亡率分別為：未轉(zhuǎn)染組(11.6±1.24)％，轉(zhuǎn)染pGCSIL-NC組(10.1±1.12)％，轉(zhuǎn)染pGCSIL-HIPK2組(6.1±1.16)％。干擾組和陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。RNA干擾HIPK2使凋亡相關(guān)蛋白caspase-3表達(dá)下調(diào)；促進細(xì)胞生長及細(xì)胞的運動能力。Transwell侵襲試驗各組細(xì)胞中穿過濾膜細(xì)胞數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義，MMP-2、MMP-9活性在各組細(xì)胞中無明顯差異。
　　結(jié)論：HI