小球藻生長因子(CGF)活性物質(zhì)的初步分離純化以及生物活性的研究.pdf

1、本研究報告主要包括三個方面:小球藻生長因子提取方法的確定、CGF活性的研究及活性物質(zhì)跟蹤手段的確定、CGF中活性物質(zhì)的初步分離純化。
　　首先利用免疫活性、抗氧化活性等指標(biāo)，比較高壓水提法、超聲法、酶解法、韓士群專利法制備的CGF，發(fā)現(xiàn):高壓水提法的產(chǎn)率雖然低于酶解法，但其CGF能夠極顯著地促進Ana-1、RAW264.7細胞的生長，同時也能促進Ana-1吞噬中性紅，吞噬率達到210.5％，還能顯著地清除OH-，清除率為80％。最

2、終確定高壓水提法為小球藻生長因子的最佳提取方法。
　　其次發(fā)現(xiàn)CGF在100μg/mL時與Ana-1共同培養(yǎng)24h后，可以顯著地促進細胞吞噬中性紅，吞噬率為213.5％，還能夠顯著地抑制LPS誘導(dǎo)細胞釋放NO的量。CGF的濃度為75μg/mL，24h可以使Ana-1細胞增殖52.3％;200μg/mL的CGF與HEK-293細胞共同培養(yǎng)48h，可以使細胞增殖310％，并呈量效關(guān)系;CGF對Hela、HepG2細胞的促增殖活性與時間

3、呈負相關(guān)關(guān)系，400μg/mL的CGF與細胞培養(yǎng)72h時的促增殖活性與24h相比下降了50％、66.9％;CGF均能促進大腸桿菌、乳酸菌細胞的增殖，并且促增殖活性呈現(xiàn)濃度依賴關(guān)系。
　　然后將CGF用丙酮、乙醇分別分離，發(fā)現(xiàn)分離得到的沉淀對Ana-1細胞的增殖活性高于上清，同時乙醇沉淀的活性也高于丙酮沉淀的，增殖活性為59.2％;其次用無水乙醇將CGF分離成粗蛋白、粗多糖等組分，發(fā)現(xiàn)粗蛋白對Ana-1細胞的增殖活性顯著地高于其他組