玉米淀粉合成酶Ⅰ基因（zsS1）啟動(dòng)子載體構(gòu)建及胚乳瞬時(shí)表達(dá).pdf

1、玉米胚乳中起主要作用的是淀粉合成酶是zSSI，其編碼基因是zsS1，該基因是玉米淀粉合成過(guò)程中的關(guān)鍵酶基因之一。本研究通過(guò)對(duì)本課題小組克隆的zsS1啟動(dòng)子(1637bp)進(jìn)行5’缺失，用來(lái)代替植物表達(dá)載體pCAMBIA1301上的CaMV35S組成型啟動(dòng)子，以gus為報(bào)告基因，構(gòu)建了5個(gè)新的植物表達(dá)載體。經(jīng)基因槍轟擊后，在授粉后15天的玉米自交系18-599胚乳上進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)。然后，用熒光定量檢測(cè)GUS表達(dá)量，測(cè)定啟動(dòng)子的活性，對(duì)zsS

2、1啟動(dòng)子的不同缺失片段進(jìn)行研究，以初步了解zsS1基因的調(diào)控機(jī)理。研究結(jié)果如下： 1)構(gòu)建了zsS1啟動(dòng)子各缺失體的瞬時(shí)表達(dá)載體pI1.6k，pI0.8k，pI0.5k，pI0.25k，pI0.18k。 2)利用玉米胚乳瞬時(shí)表達(dá)檢測(cè)zsS1啟動(dòng)子缺失體的功能，結(jié)果表明，在-762bp到-186bp之間存在一些抑制元件，負(fù)調(diào)控啟動(dòng)子的活性，尤其是在-470bp到-186bp之間有起關(guān)鍵作用的抑制性元件；在-184bp到-1

3、37bp之間有某些增強(qiáng)元件，正調(diào)控啟動(dòng)子活性。 3)GUS瞬時(shí)表達(dá)的結(jié)果表明，構(gòu)建的zsS1啟動(dòng)子各缺失體表達(dá)載體都具有啟動(dòng)子活性，同時(shí)根據(jù)構(gòu)建的pI0.25k缺失體調(diào)控下的GUS基因表達(dá)活性最強(qiáng)，初步確定zsS1啟動(dòng)子在玉米胚乳中的最短有效片段為-185到+51。 4)經(jīng)DNA序列分析，本研究中的玉米淀粉合成酶zsS1啟動(dòng)子序列，缺乏典型真核啟動(dòng)子的核心元件，TATA-box，屬于不典型啟動(dòng)子。但該啟動(dòng)子含有“Inr(