MICA基因修飾的口腔鱗癌細(xì)胞疫苗誘導(dǎo)抗腫瘤免疫應(yīng)簽的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 研究MHC-Ⅰ類鏈相關(guān)基因A修飾的口腔鱗癌細(xì)胞疫苗對(duì)免疫重建荷瘤SCID鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用及誘導(dǎo)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答的有效性，并探討其可能的作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 密度梯度離心法分離人外周靜脈血淋巴細(xì)胞(hu-PBL)，腹腔注射至已用環(huán)磷酰胺抑制骨髓造血功能的SCID鼠，建立人免疫功能重建Hu-PBL/SCID動(dòng)物模型，人IgG ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)鼠外周血清中人IgG含量以評(píng)價(jià)重

2、建效果。
　　 60Co放射源致死劑量照射轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-MICA真核表達(dá)質(zhì)粒并穩(wěn)定過(guò)表達(dá)MICA的Tb-pEGFP-N1-MICA細(xì)胞，并以轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒的Tb-pEGFP-N1細(xì)胞及未轉(zhuǎn)染的Tca8113-Tb細(xì)胞作為對(duì)照，制備滅活腫瘤細(xì)胞疫苗，分別腹腔注射接種免疫功能重建Hu-PBL/SCID鼠，共3次。2周后皮下接種Tca8113-Tb細(xì)胞，觀察成瘤情況，測(cè)量腫瘤體積及重量，計(jì)算抑瘤率。
　　 取SCID鼠外

3、周血及脾臟，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)和脾細(xì)胞表面NKG2D的表達(dá)，LDH釋放法檢測(cè)PBMC和脾細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性。
　　 采用SPSS16.0軟件包兩獨(dú)立樣本t檢測(cè)或方差分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.SCID鼠腹腔注射hu-PBL免疫重建1周后，其外周血清中即能檢測(cè)到人IgG，且在5周內(nèi)隨時(shí)間的延長(zhǎng)而升高。
　　 2.接種滅活

4、腫瘤細(xì)胞疫苗的Hu-PBL/SCID鼠皮下注射腫瘤細(xì)胞后均能順利成瘤，成瘤率100％。但Tb-pEGFP-N1-MICA疫苗組與Tca8113-Tb和Tb-pEGFP-N1疫苗組比較，移植瘤體積與重量均明顯較少(P<0.05)，抑瘤率為63.26％。
　　 3.流式細(xì)胞術(shù)及LDH釋放法檢測(cè)結(jié)果顯示Tb-pEGFP-N1-MICA疫苗組Hu-PBL/SCID鼠PBMC和脾細(xì)胞表面NKG2D的表達(dá)及殺傷活性均顯著高于Tca8113-

5、Tb和Tb-pEGFP-N1疫苗組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.SCID鼠腹腔注射細(xì)胞密度為2.5×108/mL的Hu-PBL0.2mL后，其外周血清中可持續(xù)檢測(cè)到人IgG，并隨時(shí)間延長(zhǎng)而增高，表明成功建立了免疫功能重建的hu-PBL/SCID動(dòng)物模型。
　　 2.MICA基因修飾的口腔鱗癌細(xì)胞疫苗能誘導(dǎo)機(jī)體更為強(qiáng)烈的抗腫瘤免疫應(yīng)答能力，對(duì)移植瘤生長(zhǎng)具有顯著的抑制作用。其機(jī)制可能是